Kit d'aïllament d'ARN total de plantes Kit de purificació d'ARN total per a plantes baixes en polisacàrids i polifenols
Especificacions
50 preparacions, 200 preparacions
El kit utilitza la columna giratòria i la fórmula desenvolupades per Foregene, que pot extreure eficaçment ARN total d'alta puresa i alta qualitat de diversos teixits vegetals amb baix contingut de polisacàrids i polifenols.Per a mostres de plantes amb un alt contingut de polisacàrids o polifenols, es recomana utilitzar Plant Total RNA Isolation Plus Kit per obtenir millors resultats d'extracció d'ARN.El kit proporciona la columna de neteja d'ADN que pot eliminar fàcilment l'ADN genòmic del sobrenedant i del lisat de teixits.La columna només d'ARN pot unir efectivament l'ARN.El kit pot processar un gran nombre de mostres al mateix temps.
Tot el sistema no conté RNasa, de manera que l'ARN purificat no es degradarà.El tampó PRW1 i el tampó PRW2 poden garantir que l'ARN obtingut no estigui contaminat per proteïnes, ADN, ions i compostos orgànics.
Components del kit
| Buffer PSL1, Buffer PS, Buffer PSL2 |
| Buffer PRW1, Buffer PRW2 |
| DdH lliure de RNasa2O, columna de neteja d'ADN |
| Columna només RNA |
| Instruccions |
Característiques i avantatges
■ Funcionament a temperatura ambient (15-25 ℃) durant tot el procés, sense bany de gel i centrifugació a baixa temperatura.
■ Kit complet sense RNases, no cal preocupar-se per la degradació de l'ARN.
■ La columna de neteja d'ADN s'uneix específicament a l'ADN, de manera que el kit pot eliminar la contaminació de l'ADN genòmic sense afegir DNasa.
■ Alt rendiment d'ARN: la columna només d'ARN i la fórmula única poden purificar l'ARN de manera eficient.
■ Velocitat ràpida: fàcil d'utilitzar i es pot completar en 30 minuts.
■ Seguretat: no es requereix cap reactiu orgànic.
■ Alta qualitat: els fragments d'ARN purificats són d'alta puresa, lliures de proteïnes i altres impureses i poden satisfer diverses aplicacions experimentals posteriors.
Aplicació del kit
És adequat per a l'extracció i purificació de l'ARN total de mostres de teixit vegetal fresc o congelat (especialment teixit de fulla de planta fresca) amb baix contingut de polisacàrids i polifenols.
Flux de treball
Diagrama
Plant Total RNA Isolation Kit Plus va processar 50 mg de fulles fresques de polisacàrids i polifenols, i es va provar un 5% d'ARN purificat mitjançant electroforesi.
1: plàtan
2: Ginkgo
3: Cotó
4: magrana
Emmagatzematge i vida útil
El kit es pot emmagatzemar durant 12 mesos a temperatura ambient (15-25 ℃) en ambient sec, i 2-8 ℃ durant més temps (24 mesos).
El tampó PSL1 es pot emmagatzemar a 4 ℃ durant 1 mes després d'afegir 2-hidroxi-1-etanetiol (opcional).
Guia d'anàlisi de problemes
La següent anàlisi dels problemes amb els quals us podeu trobarPlanta totalRNA extraction will help you with your experiments. In addition, for other experimental or technical problems in addition to operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us at: 028-83360257 or E-mali : Tech@foregene.com.
La columna de rotació està obstruïda
El bloqueig de la columna de spin farà que el rendiment d'ARN es redueixi o fins i tot no es pugui purificar per obtenir ARN, i la qualitat de l'ARN obtingut serà baixa.
Anàlisi de la causa comuna:
1. La mostra no es trenca completament.
La fragmentació incompleta de la mostra pot bloquejar la columna de neteja de l'ADN, que també pot afectar el rendiment i la qualitat de l'ARN.Recomanem que, en realitzar la fragmentació de la mostra, tritureu ràpidament en quantitats suficients de nitrogen líquid per trencar els teixits com ara les parets cel·lulars i les membranes cel·lulars de les mostres tant com sigui possible.Per a mostres de plantes de polisacàrids de polifenol, us recomanem que utilitzeu Plant Total RNA Isolation Kit Plus.
2.Aspireu el sobrenedant aïllat de la columna de neteja d'ADN, aspireu el possible sediment de residus cel·lulars.
El pellet de residus cel·lulars aspirat pot obstruir la columna només d'ARN durant els procediments d'adsorció d'ARN (vegeu el pas 5 del procediment, el pas 6 del procediment de polifenols de polisacàrids).Recomanem que s'ha de tenir cura en aspirar aquest sobrenedant per evitar l'aspiració de restes cel·lulars.
3. La quantitat inicial de mostra és massa gran.
L'ús excessiu de la mostra provocarà una fragmentació incompleta de la mostra o una lisi incompleta de les cèl·lules per Buffer PRL1 o Buffer PSL1, donant lloc a una columna de purificació obstruïda per a les operacions de purificació.Plant Total RNA Isolation Kit té un màxim inicial de 50 mg per purificació única d'una mostra operada.Per a mostres de plantes de polisacàrids de polifenol, us recomanem que proveu el Plant Total RNA Isolation Kit Plus.
4. La temperatura de la centrífuga és massa baixa.
Aïllament i purificació de l'ARN sencer, tret de la interrupció del nitrogen líquid del teixit de la mostra, tots els passos es realitzen a temperatura ambient (20-25 ° C).Algunes centrífugues de baixa temperatura tenen temperatures inferiors als 20 °C, cosa que pot provocar bloquejos a la columna de neteja d'ADN i/o a la columna només d'ARN.Si això passa, establiu la temperatura de la centrífuga a 20-25 °C i preescalfeu la barreja de lisi i/o l'addició de sobrenedant de separació d'etanol a 37 °C.
No s'ha extret ARN o el rendiment d'ARN és baix
Normalment hi ha molts factors que afecten l'eficiència de la recuperació, com ara: el contingut d'ARN de la mostra, el mètode d'operació, el volum d'elució, etc.
Anàlisi de les causes comunes de la següent manera:
1. Durant l'operació es va realitzar un bany de gel o una centrifugació a baixa temperatura (4 °C).
Suggeriment: Operar a temperatura ambient (15-25°C) en tot el procés, no fer bany de gel i centrifugació a baixa temperatura.
2.L'ARN s'ha degradat a causa d'una preservació inadequada de la mostra o per la conservació a llarg termini de la mostra.
Recomanació: les mostres acabades de recollir s'han de congelar ràpidament en nitrogen líquid i després emmagatzemar-les a -80 ° C durant molt de temps, evitar la congelació i descongelació repetida de les mostres;o remullar immediatament les mostres en una solució estabilitzadora d'ARN RNAlater (mostres animals).
3.La fragmentació i la lisi insuficients de la mostra condueixen al bloqueig de la columna de purificació.
Suggeriment: quan tritureu el teixit, assegureu-vos que el teixit estigui prou mòlt i transferiu-lo ràpidament al buffer PSL1 pre-preparat (confirmeu que s'ha afegit la proporció correcta de β-ME, vegeu el pas 1 del procediment).
4. L'eluent s'ha afegit incorrectament.
Suggeriment: assegureu-vos que el ddH lliure de RNasa2O es degota al mig de la membrana de la columna de purificació.
5.El volum correcte d'etanol absolut no es va afegir al tampó PSL2 o al tampó PRW2.
Suggeriment: seguiu les instruccions, afegiu el volum correcte d'etanol absolut a Buffer PSL2 i Buffer PRW2 i barregeu bé abans d'utilitzar el kit.
6.La quantitat de mostra de teixit és inadequada.
Suggeriment: Utilitzeu 50 mg de teixit per 500 μl de Buffer PSL1.L'ús de massa teixit reduirà la quantitat d'ARN extret i també es reduirà la puresa de l'ARN resultant.Recomanem fermament que la dosi inicial de la mostra no superi els 50 mg per operació d'extracció d'ARN.
7. Volum d'elució inadequat o elució incompleta.
Suggeriment: El volum d'eluent de la columna de purificació és de 50-200 μl;si l'efecte d'elució no és satisfactori, es recomana allargar el temps a temperatura ambient després d'afegir ddH preescalfat sense RNasa.2O, com ara 5-10 minuts.
8.La columna de purificació té residus d'etanol després del rentat amb Buffer PRW2.
Suggeriment: si el tub buit es centrifuga durant 1 min i encara queda etanol després del rentat al buffer PRW2, podeu augmentar el temps de centrifugació del tub buit a 2 min, o col·loqueu la columna de purificació a temperatura ambient durant 5 min per eliminar completament l'etanol residual.
9.El kit s'ha utilitzat incorrectament.
Suggeriment: per a mostres de plantes de polisacàrids polifenòlics, és possible que amb kits habituals com ara Plant Total RNA Isolation Kit no es puguin obtenir mostres d'ARN ideals.Us recomanem que utilitzeu Plant Total RNA IsolationKit Plus, que està especialment dissenyat per a mostres de plantes de polisacàrids polifenòlics.Un kit desenvolupat especialment per extreure ARN de mostres de plantes de polifenols i polisacàrids.
El valor OD260/OD280 és baix
Elució d'ARN amb ddH2O i utilitzat per a les lectures de l'espectrofotòmetre dóna com a resultat valors baixos de OD260/OD280.Recomanem utilitzar 10 mM de Tris-HCl, pH 7,5 (en lloc de ddH lliure de RNasa2O per eluir l'ARN) per obtenir valors OD260/OD280 relativament correctes, vegeu “Assajos de concentració i purificació d'ARN” a la pàgina 19.
L'ARN purificat es degrada
La qualitat de l'ARN purificat està relacionada amb factors com la conservació de la mostra, la contaminació de la RNasa i la manipulació.
Anàlisi de causes comunes:
1.Les mostres de teixit no es van emmagatzemar a temps després de la recollida.
Recomanació: si les mostres de teixit no s'utilitzen a temps després de la recollida, emmagatzemeu-les en nitrogen líquid a baixa temperatura immediatament o transferiu-les a -80 ° C per a un emmagatzematge a llarg termini després de la congelació ràpida en nitrogen líquid, o submergiu les mostres immediatament en una solució estabilitzadora d'ARN RNAlater (mostres animals).Per a l'extracció d'ARN, proveu d'utilitzar mostres de teixit acabades de recollir.
2. Congelació i descongelació repetida de mostres de teixit.
Suggeriment: En emmagatzemar mostres de teixit, el millor és tallar-les en trossos petits per conservar-les, i treure'n una part quan les utilitzeu per evitar la degradació de l'ARN provocada per la congelació i descongelació repetida de les mostres.
3.La RNasa s'introdueix a la sala d'operacions o no es fa servir guants d'un sol ús, mascaretes, etc.
Suggeriment: els experiments d'extracció d'ARN es realitzen millor en operacions d'ARN separades, i la taula de laboratori s'ha de netejar abans de l'experiment, i s'han de portar guants i màscares d'un sol ús durant l'experiment per evitar la degradació de l'ARN causada per la introducció de RNasa en la major mesura.
4.El reactiu està contaminat per RNasa durant l'ús.
Suggeriment: substituïu-lo per una nova sèrie de kits d'extracció d'ARN total de plantes per a experiments relacionats.
5. Els tubs de centrífuga i les puntes de pipeta utilitzats per a la manipulació de l'ARN estan contaminats amb RNasa.
Suggeriment: assegureu-vos que els tubs de centrífuga, les puntes de les pipetes, les pipetes, etc. utilitzats en l'extracció d'ARN no contenen RNases.
Manuals d'instruccions:
Manual d'instruccions del kit d'aïllament de l'ARN total de la planta
