QuickEasyᵀᴹ Real Time PCR Kit-Taqman
Descripcions
El 2× QuickEasyTMReal PCR Mix-Taqman proporcionat per QuickEasyTMReal Time PCR Kit-Taqman kit és un sistema de mescla mestra de nova generació dissenyat per a la reacció d'amplificació de PCR en temps real mitjançant sondes fluorescents específiques.El seu nucli Foregene HS Taq DNA Polymerase es basa en la modificació d'anticossos, que s'utilitza conjuntament amb el sistema de PCR més optimitzat de Foregene, té una major especificitat i eficiència d'amplificació.En comparació amb la barreja de PCR normal, té una capacitat d'amplificació més forta i una taxa de desajustament més baixa.Es pot utilitzar en la reacció de PCR quantitativa de fluorescència per reduir l'amplificació no específica i millorar la precisió de la PCR.Pot millorar molt l'especificitat del producte i la sensibilitat de la reacció.Al mateix temps, es va proporcionar ROX com a colorant de referència interna.
El QuickEasyTMEl kit de PCR en temps real-Taqman té un ampli àmbit d'aplicació a la quantitat de plantilla i pot obtenir una bona corba estàndard en diferents regions quantitatives, i pot quantificar i detectar amb precisió els gens objectiu amb bona repetibilitat i alta confiança.
Especificacions
200 preparacions,500 preparacions,1000 preparacions,Preparacions 2000
Components del kit
QuickEasyTMKit de PCR en temps real-Taqman(20μlsistema) | ||||
Contingut del kit | QP-01121 | QP-01122 | QP-01123 | QP-01124 |
200 preparacions | 500 preparacions | 1000 preparacions | Preparacions 2000 | |
2×RàpidFàcilTM PCR real Barrejar-Taqman | 1 ml×2 | 1,7 ml×3 | 1,7 ml×6 | 1,7 ml×12 |
20×Colorant de referència ROX | 200μL | 0,5 ml | 1 ml | 1 ml×2 |
DdH lliure de DNases2O | 1,7 ml | 1,7 ml×2 | 10 ml | 20 ml |
IFU | 1peça | 1peça | 1peça | 1peça |
Característiques i avantatges
■ L'únic sistema d'optimització de PCR fa 2×QuickEasyTMReal PCR Mix-Taqman més compatible.
■ La polimerasa Foregene HS Taq d'arrencada en calent té una eficiència d'amplificació més alta, una sensibilitat d'amplificació més alta i una especificitat d'amplificació més alta.
■ 2× QuickEasyTM Real PCR Mix -Taqman utilitza un sistema únic optimitzat per Foregene per millorar la sensibilitat i l'especificitat de la detecció de sondes específiques de la seqüència, que es pot utilitzar per a la determinació del genotip i la variació del nombre de còpies i obtenir resultats precisos.
■ Aquest producte inclou un colorant de referència interna ROX, que es pot utilitzar per eliminar el senyal de fons i l'error de senyal entre pous, cosa que és convenient que els clients l'utilitzin en diferents tipus d'instruments quantitatius de PCR.
Aplicació del kit
■ PCR quantitativa de fluorescència per a l'anàlisi quantitativa de plantilla;
■ Camplificació per PCR convencional;
■ Es pot utilitzar per a la detecció d'al·lels.
Emmagatzematge i vida útil
El kit s'ha d'emmagatzemar a -20 °C a la foscor;si s'utilitza amb freqüència, també es pot emmagatzemar a 4 °C durant un període curt de temps (utilitzar-se en 10 dies).
Principis de disseny d'imprimació de PCR en temps real
Primer i imprimació inversa
Per a la PCR en temps real, el disseny d'imprimació és molt important.Els primers estan relacionats amb l'especificitat i l'eficiència de l'amplificació per PCR i es poden dissenyar amb referència als principis següents:
Longitud d'imprimació: 18-30 bp.
Contingut de GC: 40-60%.
Valor Tm: el programari de disseny d'imprimació, com ara Primer 5, pot donar el valor Tm de la imprimació.Els valors de Tm dels cebadors aigües amunt i aigües avall haurien de ser el més propers possible.També es pot utilitzar la fórmula de càlcul Tm: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).Quan es realitza la PCR, generalment es selecciona una temperatura per sota del valor Tm de l'imprimació de 5 °C com a temperatura de recuit (l'augment corresponent de la temperatura de recuit pot augmentar l'especificitat de la reacció de PCR).
Primers i productes de PCR:
La longitud del producte d'amplificació de la PCR del primer disseny és preferiblement de 100-150 pb.
S'han d'evitar tant com sigui possible les imprimacions de disseny a l'àrea estructural secundària de la plantilla.
Eviteu la formació de 2 o més bases complementàries entre els extrems 3′ dels cebadors aigües amunt i aigües avall.
La base terminal del primer 3′ no pot estar present amb 3 G o C consecutius addicionals.
Els primers en si no poden tenir estructures complementàries, en cas contrari es formarà una estructura de forquilla que afectarà l'amplificació de la PCR.
L'ATCG s'ha de distribuir de la manera més uniforme possible en la seqüència d'encebadors i s'ha d'evitar la base terminal 3′ com a T.
Apèndix 1: paquet de complements de components del kit Cell Direct RT-qPCR
1.Solució de lisi cel·lular
| |||
Components del kit (sistema de lisi de 24 pous/pou) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
100 T | 500 T | ||
Partjo | Tampó CL | 20 ml | 100 ml |
Foregene Protease Plus II | 400 μl | 1 ml × 2 | |
Tampó ST | 1 ml × 2 | 10 ml | |
PartII | Esborrador d'ADN | 400 μl | 1 ml × 2 |
2.RT Mix
| |
Components del kit (sistema de reacció de 20 μl) | DRT-01011-B1 |
200 T | |
5 × Direct RT Mix | 800 μl |
DdH lliure de RNasa2O | 1,7 ml × 2 |
| ||
Components del kit (sistema de reacció de 20 μl) | DRT-01011-C1 | DRT-01011-C2 |
200 T | 1000 T | |
2 × Direct qPCR Mix-SYBR | 1 ml × 2 | 1,7 ml × 6 |
50 × tint de referència ROX | 40 μl | 200 μl |
DdH lliure de RNasa2O | 1,7 ml | 10 ml |