Kit d'aïllament d'ARN total animal Kits d'extracció i purificació d'ARN total per a teixits i cèl·lules animals
Descripció del kit:
Extraieu de manera ràpida i eficient ARN total d'alta puresa i alta qualitat de diversos teixits animals.
No cal preocupar-se per la degradació de l'ARN.Tot el sistema està lliure de RNases
Traieu l'ADN amb eficàcia mitjançant la columna de neteja d'ADN
Elimina l'ADN sense afegir DNasa
Simple: totes les operacions es completen a temperatura ambient
Ràpid: l'operació es pot completar en 30 minuts
Segur: no s'utilitza cap reactiu orgànic
Alta puresa: OD260/280≈1,8-2,1
Descripcions de kits
50 preparacions, 200 preparacions
Aquest kit utilitza elcolumna de rotació i fórmuladesenvolupat per la nostra empresa, que pot extreure ARN total d'alta puresa i alta qualitat de diversos teixits animals amb una alta eficiència. Proporciona una columna de neteja d'ADN eficient, que pot separar i adsorbir fàcilment l'ADN genòmic del sobrenedant i el lisat de teixit, senzill i estalvi de temps;La columna només d'ARN pot unir l'ARN de manera eficient i es pot processar simultàniament amb una fórmula única Un munt de mostres.
Tot el sistema està lliure de RNases, de manera que l'ARN extret no es degrada;Sistema de rentat de tampó RW1, tampó RW2, de manera que l'ARN obtingut estigui lliure de proteïnes, ADN, ions i contaminació de compostos orgànics.
Components del kit
| Kit d'aïllament d'ARN total animal | ||
| Components del kit | RE-03011 | RE-03014 |
| 50 T | 200 T | |
| Buffer RL1* | 25 ml | 100 ml |
| Buffer RL2 | 15 ml | 60 ml |
| Buffer RW1* | 25 ml | 100 ml |
| Buffer RW2 | 24 ml | 96 ml |
| DdH2O lliure de RNasa | 10 ml | 40 ml |
| Columna només ARN | 50 | 200 |
| Columna de neteja d'ADN | 50 | 200 |
| Manual d'instruccions | 1 peça | 1 peça |
Informació del producte
| Format | Columna giratòria | Component de purificació | Columna de gen anterior, reactiu |
| Flux | 1-24 mostres | Temps per preparació | ~30 min (24 mostres) |
| Centrífuga | Centrífuga d'escriptori | Separació per piròlisi | Separació centrífuga |
| Mostra | teixit animal;cel·la | Quantitat de mostres | Teixit: 10-20 mg;Cel·la: (1-5) × 106 |
| Volum d'elució | 50-200 μL | Volum màxim de càrrega | 850 μl |
Característiques i avantatges
■ No cal preocupar-se per la degradació de l'ARN;tot el sistema està lliure de RNases
■ Eliminar eficaçment la columna de neteja d'ADN que utilitza DNA
■ Eliminar l'ADN sense afegir DNasa
■ Simple: totes les operacions es realitzen a temperatura ambient
■ El funcionament ràpid es pot completar en 30 minuts
■ Segur: no cal reactiu orgànic
■ Alta puresa -OD260/280≈1,8-2,1
Aplicació del kit
És adequat per a l'extracció i purificació de l'ARN total d'una varietat de teixits animals frescos o congelats o cèl·lules cultivades.
Paràmetres del producte
■ Aplicacions aigües avall: síntesi d'ADNc de primera cadena, RT-PCR, clonació molecular, Northern Blot, etc.
■ Mostres: teixits animals, cèl·lules cultivades
■ Dosi: Teixits 10-20mg, Cèl·lules(2-5)×106
■ Capacitat màxima d'unió al DNA de la columna de purificació: 80 μg
■ Volum d'elució: 50-200 μl
Diagrama
Kit d'aïllament d'ARN total animal tractat 20 mg
Mostres fresques de ratolí, prengui un 5% d'ARN total purificat a l'1% d'agar
Electroforesi de glicogel
1: Melsa 2: Ronyó
3: fetge 4: cor
Emmagatzematge i vida útil
El kit es pot emmagatzemar durant 24 mesos a temperatura ambient (15-25 ℃) o 2-8 ℃ durant més temps.El tampó RL1 es pot emmagatzemar a 4 ℃ durant 1 mes després d'afegir β-mercaptoetanol (opcional).
Articles citats
1.IF:18.808:Zheng, Q., Qin, F., Luo, R., et al.Nanopartícules semblants a lípids carregades amb ARNm per a l'edició de bases hepàtiques mitjançant l'optimització del disseny central compost.Adv.Funct.Mater.2021, 31, 2011068.doi:10.1002/adfm.202011068.
2.IF:18.187:He X, Hong W, Yang J, et al.L'apoptosi espontània de cèl·lules en la preparació terapèutica de cèl·lules mare exerceix efectes immunomoduladors mitjançant l'alliberament de fosfatidilserina.Transducte de senyal objectiu Ther.14 de juliol de 2021;6(1):270.doi: 10.1038/s41392-021-00688-z.
3.SI: 17,97:Dai Z, Liu H, Liao J, et al.La modificació de l'ARNt de N7-metilguanosina millora la traducció de l'ARNm oncogènic i promou la progressió del colangiocarcinoma intrahepàtic.Cèl·lula Mol.29 de juliol de 2021: S1097-2765(21)00555-4.doi: 10.1016/j.molcel.2021.07.003.
4.SI: 9.225:Cao X, Shu Y, Chen Y, et al.La modificació m6A mediada per Mettl14 facilita la regeneració hepàtica mantenint l'homeòstasi del reticle endoplasmàtic.Cell Mol Gastroenterol Hepatol.2021;12(2):633-651.doi: 10.1016/j.jcmgh.2021.04.001.
Kits d'aïllament d'ARN per a altres fonts de mostraestà disponible:
Cèl·lula, vegetal, viral, sang, etc.
L'ARN no s'extreu o els rendiments d'ARN són baixos
Sovint hi ha una varietat de factors que afecten l'eficiència de la recuperació, com ara: contingut d'ARN de la mostra de teixit, mètode d'operació, volum d'elució, etc.
1. Durant el funcionament es va realitzar una centrifugació amb bany de gel o criogènica (4 °C).
Recomanació: Operar a temperatura ambient (15-25 °C) durant tot el procés, no banyar-se amb gel i centrifugar a baixa temperatura.
2. Conservació inadequada de la mostra o temps d'emmagatzematge excessiu de la mostra.
Recomanació: emmagatzemar les mostres a -80 °C o congelar en nitrogen líquid i evitar l'ús repetit de congelació-descongelació;intenteu utilitzar teixit fresc o cèl·lules cultivades per a l'extracció d'ARN.
3. Lisi insuficient de la mostra.
Recomanació: en homogeneïtzar el teixit, assegureu-vos que el teixit estigui prou homogeneïtzat i que les cèl·lules del teixit estiguin prou dividides per explicar l'alliberament d'ARN.
4. L'eluent no s'afegeix correctament.
Recomanació: confirmeu que el ddH lliure de RNasa2S'afegeix O gota a gota al centre de la membrana de la columna de purificació.
5. No es va afegir el volum correcte d'etanol absolut al tampó RL2 o al tampó RW2.
Recomanació: Seguiu les instruccions, afegiu el volum correcte d'etanol absolut a Buffer RL2 i Buffer RW2 i barregeu bé abans d'utilitzar el kit.
6. La dosi de la mostra de teixit no és adequada.
Recomanació: utilitzeu 10-20 mg de teixit o (1-5) × 106cèl·lules per 500 μl de tampó RL1, ja que l'ús excessiu de teixits pot provocar una reducció de l'extracció d'ARN.
7. Volum d'elució incorrecte o elució incompleta.
Recomanació: el volum d'elució de la columna de purificació és de 50-200 μl;si l'efecte d'elució no és satisfactori, es recomana allargar el temps de col·locació a temperatura ambient després d'afegir ddH preescalfat sense RNasa.2O, p. ex. durant 5-10 min.
8.La columna de purificació té residus d'etanol després del rentat del buffer RW2.
Recomanació: si hi ha residus d'etanol després del rentat del buffer RW2, centrifugació del tub buit durant 1 min, el temps per a l'operació de centrifugació del tub buit es pot augmentar a 2 min, o la columna de purificació es pot col·locar a temperatura ambient durant 5 min per eliminar adequadament l'etanol residual.
L'ARN purificat es degrada
La qualitat de l'ARN purificat està relacionada amb factors com la conservació de la mostra, la contaminació de la RNasa i la manipulació, etc.
1. Les mostres de teixit no es conserven a temps.
Recomanació: si les mostres de teixit o cèl·lules no s'utilitzen de manera oportuna després de la recollida, criopreservar immediatament a -80 °C o nitrogen líquid.Per extreure l'ARN, utilitzeu una mostra de teixit o cèl·lula acabada de prendre sempre que sigui possible.
2. Congelació-descongelació repetida de mostres de teixit.
Recomanació: en emmagatzemar mostres de teixit, el millor és tallar-les en trossos petits per a la seva conservació i treure'n una de les peces quan les utilitzeu per evitar la congelació-descongelació repetida de la mostra i la degradació de l'ARN.
3. La RNasa s'introdueix o no utilitzant guants d'un sol ús, mascaretes, etc. durant l'operació.
Recomanació: els experiments d'extracció d'ARN es realitzen millor en sales de manipulació d'ARN separades i la taula s'esborra abans de l'experiment.
Utilitzeu guants i màscares d'un sol ús durant l'experiment per minimitzar la degradació de l'ARN causada per la introducció de la RNasa.
4. Els reactius estan contaminats amb RNasa durant l'ús.
Recomanació: substituïu-lo per un nou kit d'aïllament d'ARN total animal per a experiments relacionats.
5. Els tubs de centrífuga, puntes, etc. utilitzats en la manipulació de l'ARN estan contaminats amb RNasa.
Recomanació: Confirmeu que els tubs de centrífuga, puntes, pipetes, etc. utilitzats en l'extracció d'ARN no contenen RNases.
L'ARN obtingut purificat afecta els experiments aigües avall
L'ARN purificat per la columna de purificació, si els ions de sal, el contingut de proteïnes és massa gran afectarà l'experiment aigües avall, com ara: transcripció inversa, Northern Blot et al.
1. L'ARN eluït té residus d'ions de sal.
Recomanació: Confirmeu que s'ha afegit el volum correcte d'etanol al tampó RW2 i feu 2 rentats de columna de purificació a la velocitat centrífuga indicada per al funcionament;si hi ha residus d'ions de sal, deixeu la columna de purificació al tampó RW2 durant 5 min a temperatura ambient i feu una centrifugació per maximitzar l'eliminació de la contaminació de la sal.
2. Residus d'etanol en l'ARN eluït.
Recomanació: Confirmeu que després del rentat del tampó RW2, realitzeu l'operació de centrifugació del tub buit a la velocitat de centrifugació indicada per al funcionament, augmenteu el temps de l'operació de centrifugació del tub buit a 2 minuts si encara hi ha residus d'etanol o deixeu-lo a temperatura ambient durant 5 minuts després de la centrifugació del tub buit per maximitzar l'eliminació de l'etanol.
