Kit d'aïllament d'ARN total de cèl·lules Kits de purificació d'aïllament d'ARN total de cèl·lules
Descripció del kit:
Es pot obtenir ARN total altament purificat i d'alta qualitat a partir de diverses cèl·lules cultivades en 11 minuts.
Lliure de RNasa
Funciona a temperatura ambient (15-25 ℃)
Amb columna de neteja d'ADN
Alt rendiment d'ARN
Ràpid: acaba l'extracció en 11 minuts
Seguretat: cap químic orgànic
Descripció
Aquest kit utilitza la columna giratòria i la fórmula desenvolupades per Foregene, que pot extreure eficientment ARN total d'alta puresa i alta qualitat de cèl·lules cultivades en plaques de 96, 24, 12 i 6 pous.
El kit proporciona una columna de neteja d'ADN eficient, que pot separar fàcilment el sobrenedant i el lisat cel·lular, unir i eliminar l'ADN genòmic.El funcionament és senzill i estalvia temps.
TLa columna només d'ARN pot unir l'ARN de manera eficient amb una fórmula única.Es poden processar un gran nombre de mostres simultàniament.
Components del kit
| Composició del kit | RE-03111 | RE-03114 |
| 50 T | 200 T | |
| Buffer cRL1* | 25 ml | 100 ml |
| Buffer cRL2 | 15 ml | 60 ml |
| Buffer RW1* | 25 ml | 100 ml |
| Buffer RW2 | 24 ml | 96 ml |
| DdH2O lliure de RNasa | 10 ml | 40 ml |
| Columna només RNA | 50 | 200 |
| Columna de neteja d'ADN | 50 | 200 |
| Instrucció | 1 | 1 |
* Si us plau, utilitzeu guants i preneu mesures de protecció durant l'operació, ja que Buffer cRL1 i Buffer RW1 contenen sals caotròpiques irritants.
Característiques i avantatges
■ Tot el procés funciona a temperatura ambient (15-25 ℃), sense bany de gel i centrifugació a baixa temperatura.
■ Tot el kit està lliure de RNases, no cal preocupar-se per la degradació de l'ARN.
■ La columna de neteja d'ADN uneix específicament l'ADN, de manera que el kit pot eliminar la contaminació d'ADN genòmic sense afegir DNasa addicional.
■ Alt rendiment d'ARN: la columna només d'ARN i la fórmula única poden purificar l'ARN de manera eficient.
■ Velocitat ràpida: fàcil d'utilitzar i es pot completar en 11 minuts.
■ Seguretat: no es requereix cap reactiu orgànic.
■ Alta qualitat: l'ARN purificat és d'alta puresa, lliure de proteïnes i altres impureses, i pot complir amb diversos experiments posteriors.
Aplicació del kit
És adequat per a l'extracció i purificació de l'ARN total de cèl·lules cultivades en plaques de 96, 24, 12 i 6 pous.
Flux de treball
Diagrama
El diagrama de la bateria de gel d'agarosa del kit d'aïllament d'ARN total de cèl·lules va tractar els diferents nombres de cèl·lules anteriors, 20 μl d'elució de volum, 2 μl d'ARN total purificat a l'1%.
Emmagatzematge i vida útil
El kit es pot emmagatzemar durant 12 mesos a temperatura ambient (15-25 ℃) o 2-8 ℃ durant més temps (24 mesos).
El tampó cRL1 es pot emmagatzemar a 4 ℃ durant 1 mes després d'afegir 2-hidroxi-1-etanetiol (opcional).
L'ARN no s'extreu o els rendiments d'ARN són baixos
Sovint hi ha una varietat de factors que afecten l'eficiència de la recuperació, com ara: contingut d'ARN de la mostra de teixit, mètode d'operació, volum d'elució, etc.
1. Durant el funcionament es va realitzar una centrifugació amb bany de gel o criogènica (4 °C).
Recomanació: Operar a temperatura ambient (15-25 °C) durant tot el procés, no banyar-se amb gel i centrifugar a baixa temperatura.
2. Conservació inadequada de la mostra o temps d'emmagatzematge excessiu de la mostra.
Recomanació: emmagatzemar les mostres a -80 °C o congelar en nitrogen líquid i evitar l'ús repetit de congelació-descongelació;intenteu utilitzar teixit fresc o cèl·lules cultivades per a l'extracció d'ARN.
3. Lisi insuficient de la mostra.
Recomanació: en homogeneïtzar el teixit, assegureu-vos que el teixit estigui prou homogeneïtzat i que les cèl·lules del teixit estiguin prou dividides per explicar l'alliberament d'ARN.
4. L'eluent no s'afegeix correctament.
Recomanació: confirmeu que el ddH lliure de RNasa2S'afegeix O gota a gota al centre de la membrana de la columna de purificació.
5. No es va afegir el volum correcte d'etanol absolut al tampó RL2 o al tampó RW2.
Recomanació: Seguiu les instruccions, afegiu el volum correcte d'etanol absolut a Buffer RL2 i Buffer RW2 i barregeu bé abans d'utilitzar el kit.
6. La dosi de la mostra de teixit no és adequada.
Recomanació: utilitzeu 10-20 mg de teixit o (1-5) × 106cèl·lules per 500 μl de tampó RL1, ja que l'ús excessiu de teixits pot provocar una reducció de l'extracció d'ARN.
7. Volum d'elució incorrecte o elució incompleta.
Recomanació: el volum d'elució de la columna de purificació és de 50-200 μl;si l'efecte d'elució no és satisfactori, es recomana allargar el temps de col·locació a temperatura ambient després d'afegir ddH preescalfat sense RNasa.2O, p. ex. durant 5-10 min.
8.La columna de purificació té residus d'etanol després del rentat del buffer RW2.
Recomanació: si hi ha residus d'etanol després del rentat del buffer RW2, centrifugació del tub buit durant 1 min, el temps per a l'operació de centrifugació del tub buit es pot augmentar a 2 min, o la columna de purificació es pot col·locar a temperatura ambient durant 5 min per eliminar adequadament l'etanol residual.
L'ARN purificat es degrada
La qualitat de l'ARN purificat està relacionada amb factors com la conservació de la mostra, la contaminació de la RNasa i la manipulació, etc.
1. Les mostres de teixit no es conserven a temps.
Recomanació: si les mostres de teixit o cèl·lules no s'utilitzen de manera oportuna després de la recollida, criopreservar immediatament a -80 °C o nitrogen líquid.Per extreure l'ARN, utilitzeu una mostra de teixit o cèl·lula acabada de prendre sempre que sigui possible.
2. Congelació-descongelació repetida de mostres de teixit.
Recomanació: en emmagatzemar mostres de teixit, el millor és tallar-les en trossos petits per a la seva conservació i treure'n una de les peces quan les utilitzeu per evitar la congelació-descongelació repetida de la mostra i la degradació de l'ARN.
3. La RNasa s'introdueix o no utilitzant guants d'un sol ús, mascaretes, etc. durant l'operació.
Recomanació: els experiments d'extracció d'ARN es realitzen millor en sales de manipulació d'ARN separades i la taula s'esborra abans de l'experiment.
Utilitzeu guants i màscares d'un sol ús durant l'experiment per minimitzar la degradació de l'ARN causada per la introducció de la RNasa.
4. Els reactius estan contaminats amb RNasa durant l'ús.
Recomanació: substituïu-lo per un nou kit d'aïllament d'ARN total animal per a experiments relacionats.
5. Els tubs de centrífuga, puntes, etc. utilitzats en la manipulació de l'ARN estan contaminats amb RNasa.
Recomanació: Confirmeu que els tubs de centrífuga, puntes, pipetes, etc. utilitzats en l'extracció d'ARN no contenen RNases.
L'ARN obtingut purificat afecta els experiments aigües avall
L'ARN purificat per la columna de purificació, si els ions de sal, el contingut de proteïnes és massa gran afectarà l'experiment aigües avall, com ara: transcripció inversa, Northern Blot et al.
1. L'ARN eluït té residus d'ions de sal.
Recomanació: Confirmeu que s'ha afegit el volum correcte d'etanol al tampó RW2 i feu 2 rentats de columna de purificació a la velocitat centrífuga indicada per al funcionament;si hi ha residus d'ions de sal, deixeu la columna de purificació al tampó RW2 durant 5 min a temperatura ambient i feu una centrifugació per maximitzar l'eliminació de la contaminació de la sal.
2. Residus d'etanol en l'ARN eluït.
Recomanació: Confirmeu que després del rentat del tampó RW2, realitzeu l'operació de centrifugació del tub buit a la velocitat de centrifugació indicada per al funcionament, augmenteu el temps de l'operació de centrifugació del tub buit a 2 minuts si encara hi ha residus d'etanol o deixeu-lo a temperatura ambient durant 5 m.
