• facebook
  • linkedin
  • youtube
pancarta

Explicació dels termes bàsics de biologia molecular

Kits de Biologia Molecular

1. ADNc i ADNcc: l'ADNc és un ADN de doble cadena sintetitzat per transcriptasa inversa a partir de l'ARNm;cccDNA és un plasmidi d'ADN circular tancat de doble cadena lliure del cromosoma.
2. Unitat de plegament estàndard: la unitat d'estructura secundària de proteïnes α-hèlix i β-full poden formar blocs estructurals amb disposicions geomètriques especials mitjançant diversos polipèptids de connexió.Aquest tipus de plegament determinat se sol anomenar estructura súper secundària.Gairebé totes les estructures terciàries es poden descriure mitjançant aquests tipus de plegament, i fins i tot els seus tipus combinats, de manera que també s'anomenen unitats de plegament estàndard.
3. CAP: proteïna receptora d'adenosina monofosfat cíclica (cAMP) CRP (proteïna receptora d'AMPc), el complex format després de la combinació de cAMP i CRP s'anomena proteïna activadora CAP (proteïna activada per cAMP)
4. Seqüència palindròmica: la seqüència complementària inversa d'un segment d'un fragment d'ADN, sovint un lloc d'enzim de restricció.
5. ARNm: ARN interferent complementari o ARN antisentit, que és complementari a la seqüència d'ARNm i pot inhibir la traducció de l'ARNm.
6. Ribozima: ARN amb activitat catalítica, que té un paper autocatalític en el procés d'empalmament de l'ARN.
7. Motiu: hi ha algunes regions locals amb forma i topologia tridimensional similars en l'estructura espacial de les molècules de proteïnes
8. Pèptid senyal: pèptid amb 15-36 residus d'aminoàcids a l'extrem N-terminal durant la síntesi de proteïnes, que guia la transmembrana de la proteïna.
9. Atenuador: seqüència de nucleòtids entre una regió operadora i un gen estructural que acaba la transcripció.
10. Punt màgic: quan el bacteri creix i es troba amb una manca total d'aminoàcids, el bacteri produirà una resposta d'emergència per aturar l'expressió de tots els gens.Els senyals que generen aquesta resposta d'emergència són el tetrafosfat de guanosina (ppGpp) i el pentafosfat de guanosina (pppGpp).El paper de PpGpp i pppGpp no ​​és només un o uns quants operons, sinó que afecta un gran nombre d'ells, per la qual cosa s'anomenen superreguladors o punts màgics.
11. Element promotor aigües amunt: fa referència a la seqüència d'ADN que té un paper regulador en l'activitat del promotor, com ara TATA a la regió -10, TGACA a la regió -35, potenciadors i atenuadors.
12. Sonda d'ADN: segment d'ADN marcat amb una seqüència coneguda, que s'utilitza àmpliament per detectar seqüències desconegudes i cridar gens diana.
13. Seqüència SD: És la seqüència d'unió del ribosoma i l'ARNm, que regula la traducció.
14. Anticòs monoclonal: Anticòs que actua només contra un únic determinant antigènic.
15. Còsmid: És un vector d'ADN exògen construït artificialment que reté les regions COS als dos extrems del fag i està connectat al plasmidi.
16. Cribratge de taques blanques-blaves: el gen LacZ (que codifica la β-galactosidasa), l'enzim pot descompondre el substrat cromogènic X-gal (5-bromo-4-cloro-3-indol-β-D-galactoside) per produir blau, fent així la soca blava.Quan s'insereix l'ADN exògen, el gen LacZ no es pot expressar i la soca és blanca, per tal de cridar els bacteris recombinants.Això s'anomena cribratge blau-blanc.
17. Element d'acció cis: una seqüència específica de bases de l'ADN que regula l'expressió gènica.
18. Enzima Klenow: fragment gran de l'ADN polimerasa I, excepte que l'activitat exonucleasa 5' 3' s'elimina de l'holoenzim de l'ADN polimerasa I
19. PCR ancorada: s'utilitza per amplificar l'ADN d'interès amb una seqüència coneguda en un extrem.Es va afegir una cua de poli-dG a un extrem de la seqüència desconeguda i, a continuació, es va utilitzar el poli-dC i la seqüència coneguda com a cebadors per a l'amplificació per PCR.
20. Proteïna de fusió: el gen de la proteïna eucariota està connectat amb el gen exògen, i la proteïna composta per la traducció de la proteïna del gen original i la proteïna exògena s'expressa al mateix temps.

Altres termes de biologia molecular

1. El mapa físic de l'ADN és l'ordre en què es disposen els fragments (digerits per l'endonucleasa de restricció) de la molècula d'ADN.
2. La divisió de la RNasa es divideix en dos tipus (autocatàlisi) i (heterocatàlisi).
3. Hi ha tres factors d'iniciació en procariotes són (IF-1), (IF-2) i (IF-3).
4. Les proteïnes transmembrana requereixen guia (pèptids senyal), i el paper de les chaperones proteiques és (ajuda a plegar la cadena peptídica en la conformació nativa de la proteïna).
5. Els elements dels promotors generalment es poden dividir en dos tipus: (elements promotors centrals) i (elements promotors aigües amunt).
6. El contingut de la recerca de la biologia molecular inclou principalment tres parts: (biologia molecular estructural), (expressió i regulació gènica) i (tecnologia de recombinació de l'ADN).
7. Els dos experiments clau que demostren que l'ADN és el material genètic són (infecció per pneumococ de ratolins) i (infecció del fag T2 d'Escherichia coli).potencial).
8. Hi ha dues diferències principals entre l'ARNm i l'ARNm: (l'ARNm s'empalma en el procés de conversió en ARNm), (l'extrem 5' de l'ARNm s'afegeix amb una tapa m7pGppp, i hi ha una poliadenilació addicional a l'extrem 3' de la cua de l'àcid de l'ARNm (poliA)).
9. Els avantatges de la forma de proteïna multisubunitat són (la subunitat és un mètode econòmic per a la utilització de l'ADN), (pot reduir l'impacte dels errors aleatoris en la síntesi de proteïnes en l'activitat de la proteïna), (l'activitat pot ser molt eficient i ràpida s'obre i es tanca).
10. El contingut principal de la teoria de la primera nucleació del mecanisme de plegament de proteïnes inclou (nucleació), (enriquiment estructural), (reordenació final).
11. La galactosa té un doble efecte sobre els bacteris;d'una banda (es pot utilitzar com a font de carboni per al creixement cel·lular);d'altra banda (també és un component de la paret cel·lular).Per tant, es necessita un promotor S2 independent de cAMP-CRP per a la síntesi permanent a nivell de fons;al mateix temps, es necessita un promotor S1 dependent de cAMP-CRP per regular la síntesi d'alt nivell.La transcripció comença des de ( S2 ) amb G i des de ( S1 ) sense G.
12. La tecnologia de l'ADN recombinant també es coneix com (clonació gènica) o (clonació molecular).L'objectiu final és (transferir l'ADN d'informació genètica d'un organisme a un altre organisme).Un experiment típic de recombinació d'ADN sol incloure els passos següents: (1) Extraure el gen objectiu (o gen exogen) de l'organisme donant i connectar-lo enzimàticament a una altra molècula d'ADN (vector de clonació) per formar una nova molècula d'ADN recombinant.② La molècula d'ADN recombinant es transfereix a la cèl·lula receptora i es replica a la cèl·lula receptora.Aquest procés s'anomena transformació.③ Explorar i identificar les cèl·lules receptores que han absorbit l'ADN recombinant.④Conreu les cèl·lules que contenen ADN recombinant en grans quantitats per detectar si s'expressa el gen d'ajuda estrangera.
13. Hi ha dos tipus de replicació plasmídica: els que estan estrictament controlats per la síntesi de proteïnes de la cèl·lula hoste s'anomenen (plasmids estrets), i els que no estan estrictament controlats per la síntesi de proteïnes de la cèl·lula hoste s'anomenen (plasmids relaxats).
14. El sistema de reacció de PCR ha de tenir les condicions següents: a.Cebadors d'ADN (unes 20 bases) amb seqüències complementàries a cada extrem de les dues cadenes del gen diana a separar.b.Enzims amb estabilitat tèrmica com ara: TagDNA polimerasa.c, dNTPd, seqüència d'ADN d'interès com a plantilla
15. El procés de reacció bàsic de la PCR inclou tres etapes: (desnaturalització), (recuit) i (extensió).
16. El procés bàsic dels animals transgènics sol incloure: ①Introducció d'un gen estrany clonat al nucli d'un òvul fecundat o una cèl·lula mare embrionària;②Transplantament de l'òvul fecundat inoculat o de la cèl·lula mare embrionària a l'úter femení;③Desenvolupament i creixement embrionari complets per a la descendència amb gens estrangers;④ Utilitzeu aquests animals que poden produir proteïnes estranyes com a reproductor per criar noves línies homozigotes.
17. Les línies cel·lulars d'hibridoma es generen hibridant cèl·lules (melsa B) amb cèl·lules (mieloma), i com que (les cèl·lules de la melsa) poden utilitzar hipoxantina i (cèl·lules òssies) proporcionen funcions de divisió cel·lular, es poden cultivar en medi HAT.créixer.
18. Amb l'aprofundiment de la recerca, la primera generació d'anticossos s'anomena (anticossos policlonals), la segona generació (anticossos monoclonals) i la tercera generació (anticossos d'enginyeria genètica).
19. Actualment, l'enginyeria genètica dels virus d'insectes se centra principalment en el baculovirus, que es manifesta en la introducció de (gen de la toxina exògena);(gens que pertorben el cicle de vida normal dels insectes);(modificació dels gens del virus).
20. Els factors de proteïnes transaccionants corresponents als elements comuns TATA, GC i CAAT en el promotor de l'ARN polimerasa II dels mamífers són (TFIID), (SP-1) i (CTF/NF1), respectivament.
vint-i-u.Els factors de transcripció bàsics de l'ARN polimerasa Ⅱ són, TFⅡ-A, TFⅡ-B, TFII-D, TFⅡ-E, i la seva seqüència d'unió és: (D, A, B, E).En què la funció de TFII-D és (enllaç amb la caixa TATA).
vint-i-dos.La majoria dels factors de transcripció que s'uneixen a l'ADN funcionen en forma de dímers.Els dominis funcionals dels factors de transcripció que s'uneixen a l'ADN són habitualment els següents (hèlix-gir-hèlix), (motiu del dit de zinc), motiu de cremallera (leucina bàsica).
vint-i-tres.Hi ha tres tipus de modes d'escissió de l'endonucleasa de restricció: (tallar al costat de 5' de l'eix de simetria per generar extrems enganxosos de 5'), (tallar al costat de 3' de l'eix de simetria per generar extrems enganxosos de 3' (tallar a l'eix de simetria per generar segments plans)).
vint-i-quatre.L'ADN plasmidi té tres configuracions diferents: (configuració SC), (configuració oc), (configuració L).El primer en electroforesi és (configuració SC).
25. Sistemes d'expressió gènica exògena, principalment (Escherichia coli), (llevat), (insecte) i (taula de cèl·lules de mamífers).
26. Els mètodes utilitzats habitualment per als animals transgènics són: (mètode d'infecció retroviral), (mètode de microinjecció d'ADN), (mètode de cèl·lules mare embrionàries).

Aplicació Biologia molecular

1. Anomena les funcions de més de 5 ARN?
ARNt de transferència Aminoàcid de transferència Ribosoma ARN ARNr Ribosoma constitueix ARN missatger ARNm Plantilla de síntesi de proteïnes ARN nuclear heterogeni Precursor d'ARNm madur petit ARN nuclear snRNA Implicat en l'empalmament de hnRNA Petit ARN citoplasmàtic ARN scRNA/7SL-RNA Proteïna Components plasmàtics ARNn sintètics/reticle ARNn localitzats senyals i ARN localitzats Components anti-localitzats expressió Ribozima ARN ARN enzimàticament actiu
2. Quina és la principal diferència entre els promotors procariotes i eucariotes?
TTGACA procariota --- TATAAT------Lloc d'iniciació-35 -10 Potenciador eucariota---GC ---CAAT----TATAA-5mGpp-Lloc d'iniciació-110 -70 -25
3. Quins són els aspectes principals de la construcció artificial de plasmidis naturals?
Els plasmidis naturals sovint tenen defectes, per la qual cosa no són adequats per al seu ús com a portadors per a l'enginyeria genètica, i s'han de modificar i construir: a.Afegiu gens marcadors de selecció adequats, com ara dos o més, que són fàcils d'utilitzar per a la selecció, normalment gens antibiòtics.b.Augmentar o disminuir els llocs de tall d'enzims adequats per facilitar la recombinació.c.Escurçar la longitud, tallar fragments innecessaris, millorar l'eficiència d'importació i augmentar la capacitat de càrrega.d.Canvieu el replicó, de ajustat a solt, de menys còpies a més còpies.e.Afegiu elements genètics especials segons els requisits especials de l'enginyeria genètica
4. Doneu un exemple d'un mètode de cribratge diferencial d'ADNc específic de teixit?
Es preparen dues poblacions cel·lulars, el gen objectiu s'expressa o s'expressa molt en una de les cèl·lules, i el gen objectiu no s'expressa o s'expressa poc a l'altra cèl·lula, i després es troba el gen objectiu mitjançant hibridació i comparació.Per exemple, durant l'aparició i desenvolupament de tumors, les cèl·lules tumorals presentaran ARNm amb diferents nivells d'expressió que les cèl·lules normals.Per tant, els gens relacionats amb el tumor es poden eliminar mitjançant hibridació diferencial.El mètode d'inducció també es pot utilitzar per detectar els gens l'expressió dels quals s'indueix.
5. Generació i cribratge de línies cel·lulars d'hibridomes?
Cèl·lules B de melsa + cèl·lules de mieloma, afegeix polietilenglicol (PEG) per promoure la fusió cel·lular, i les cèl·lules de fusió de mieloma B esplènic cultivades en medi HAT (que conté hipoxantina, aminopterina, T) continuen expandint-se nodreixent.La fusió cel·lular conté: cèl·lules de fusió melsa-melsa: no poden créixer, les cèl·lules de la melsa no es poden cultivar in vitro.Cèl·lules de fusió ossi-os: no poden utilitzar hipoxantina, però poden sintetitzar purina a través de la segona via utilitzant folat reductasa.L'aminopterina inhibeix la folat reductasa i, per tant, no pot créixer.Cèl·lules de fusió òssia-melsa: poden créixer en HAT, les cèl·lules de melsa poden utilitzar hipoxantina i les cèl·lules òssies proporcionen la funció de divisió cel·lular.
6. Quin és el principi i el mètode per determinar l'estructura primària de l'ADN pel mètode de terminació didesoxi terminal (mètode Sanger)?
El principi és utilitzar un terminador de cadena de nucleòtids—2,,3,-didesoxinucleòtids per acabar l'extensió de l'ADN.Com que no té el 3-OH necessari per a la formació d'enllaços 3/5/fosfodièster, un cop incorporat a la cadena d'ADN, la cadena d'ADN no es pot estendre més.D'acord amb el principi d'aparellament de bases, sempre que l'ADN polimerasa necessiti dNMP per participar en la cadena d'ADN estesa normalment, hi ha dues possibilitats, una és participar en ddNTP, que es tradueix en la finalització de l'extensió de la cadena desoxinucleòtid;l'altra és participar en dNTP , de manera que la cadena d'ADN encara es pugui continuar estenent fins que s'incorpori el següent ddNTP.Segons aquest mètode, es pot obtenir un grup de fragments d'ADN de diferents longituds que acaben en ddNTP.El mètode consisteix a dividir-lo en quatre grups, respectivament, ddAMP, ddGMP, ddCMP i ddTMP.Després de la reacció, l'electroforesi en gel de poliacrilamida pot llegir la seqüència d'ADN segons les bandes de natació.
7. Quin és l'efecte de regulació positiu de la proteïna activadora (CAP) en la transcripció?
Proteïna del receptor d'adenilat cíclic (cAMP) CRP (proteïna del receptor d'AMPc), el complex format per la combinació d'AMPc i CRP s'anomena CAP (proteïna activada per cAMP).Quan es cultiva E. coli en un medi sense glucosa, la síntesi de CAP augmenta, i la CAP té la funció d'activar promotors com la lactosa (Lac).Alguns promotors dependents de CRP no tenen la característica típica de seqüència de regió -35 (TTGACA) que tenen els promotors comuns.Per tant, és difícil que l'ARN polimerasa s'uneixi a ella.La presència de CAP (funció): pot millorar significativament la constant d'unió de l'enzim i el promotor.Principalment mostra els dos aspectes següents: ① CAP ajuda a la molècula enzimàtica a orientar-se correctament canviant la conformació del promotor i la interacció amb l'enzim, per tal de combinar-se amb la regió -10 i jugar el paper de substituir la funció de la regió -35.②CAP també pot inhibir la unió de l'ARN polimerasa a altres llocs de l'ADN, augmentant així la probabilitat d'unir-se al seu promotor específic.
8. Quins passos s'inclouen normalment en un experiment típic de recombinació d'ADN?
a.Extraieu el gen objectiu (o gen exogen) de l'organisme donant i connecteu-lo enzimàticament a una altra molècula d'ADN (vector de clonació) per formar una nova molècula d'ADN recombinant.b.Transferir la molècula d'ADN recombinant a la cèl·lula receptora i replicar-la i conservar-la a la cèl·lula receptora.Aquest procés s'anomena transformació.c.Explorar i identificar aquelles cèl·lules receptores que han absorbit l'ADN recombinant.d.Cultivar en massa les cèl·lules que contenen l'ADN recombinant per detectar si el gen d'ajuda estrangera s'expressa.
9. Construcció de la genoteca Es donen tres mètodes de cribratge de recombinants i es descriu breument el procés.
Cribratge de resistència als antibiòtics, inactivació insercional de la resistència, cribratge de taques blanques blaves o PCR, cribratge diferencial, sonda d'ADN La majoria dels vectors de clonació porten gens de resistència als antibiòtics (anti-ampicil·lina, tetraciclina).Quan el plasmidi es transfereix a Escherichia coli, els bacteris adquiriran resistència, i aquells sense transferència no tindran resistència.Però no pot distingir si s'ha reorganitzat o no.En un vector que conté dos gens de resistència, si s'insereix un fragment d'ADN estrany en un dels gens i fa que el gen s'inactivi, es poden utilitzar dos controls de placa que contenen diferents fàrmacs per detectar recombinants positius.Per exemple, el plasmidi pUC conté el gen LacZ (que codifica β-galactosidasa), que pot descompondre el substrat cromogènic X-gal (5-bromo-4-cloro-3-indol-β-D-galactoside) per produir blau, convertint així la soca en blau.Quan s'insereix l'ADN estrany, el gen LacZ no es pot expressar i la soca és blanca, per tal de cridar els bacteris recombinants.
10. Explica el procés bàsic d'obtenció d'animals transgènics mitjançant cèl·lules mare embrionàries?
Les cèl·lules mare embrionàries (ES) són cèl·lules embrionàries durant el desenvolupament embrionari, que es poden cultivar i proliferar artificialment i tenen la funció de diferenciar-se en altres tipus de cèl·lules.Cultiu de cèl·lules ES: la massa cel·lular interna del blastocist s'aïlla i es cultiva.Quan ES es cultiva en una capa sense alimentador, es diferenciarà en diverses cèl·lules funcionals, com ara cèl·lules musculars i cèl·lules N.Quan es cultiva en un medi que conté fibroblasts, ES mantindrà la funció de diferenciació.ES es pot manipular genèticament i la seva funció de diferenciació es pot integrar sense afectar la seva funció de diferenciació, la qual cosa resol el problema de la integració aleatòria.Introduïu gens exògens a les cèl·lules mare embrionàries, després implanteu-los a l'úter de ratolins femelles embarassades, desenvolupeu-los en cadells i encreueu-los per obtenir ratolins homozigots.