La baixa relació d'A260/A230 sol ser causada per impureses amb la màxima longitud d'ona d'absorció a 230 nm.Vegem què inclouen aquestes impureses:

• Contaminants comuns	Longitud d'ona d'absorció	Efecte ràtio
  Proteïna	~230 nm i 280 nm	Reducció simultània d'A260/A 280i A260/A 280ràtios
  Sal de guanidina	220-240 nm	Redueix l'A260/A 280proporció
  Fenol	~270 nm	-
  Trizol	~230 nm i 270 nm	Redueix l'A260/A 280proporció
  EDTA	~230 nm	Redueix l'A260/A 280proporció
  Etanol	230-240 nm	Redueix l'A260/A 280proporció

 
 
 
Longitud d'ona d'absorció i valor de contrast dels contaminants comuns

Pcontaminació per roteïna
La contaminació per proteïnes es pot considerar com la contaminació més comuna en el procés d'extracció d'àcids nucleics.La proteïna existeix entre la fase aquosa superior i la inferiororgànicafase .La contaminació reduirà la relació d'A260/A280 i A260/A230 alhora, i la relació d'A260/A230 canviarà de manera més evident que la relació d'A260/A280.
Durant la posteriortranscripció inversaor Reaccions de qPCR, els residus de proteïnes poden inhibir o interferir amb la funció enzimàtica.La millor manera d'evitar la contaminació de proteïnes és tenir en compte el principi de "més menys que més, una petita quantitat moltes vegades" quan s'aspira el sobrenedant.

2. Contaminació per guanidini
El clorhidrato (GuHCl) i el tiocianat de guanidina (GTC) tenen l'efecte de desnaturalitzar les proteïnes, que poden destruir ràpidament les membranes cel·lulars durant el procés d'extracció d'àcids nucleics, provocant la desnaturalització i la precipitació de proteïnes.La longitud d'ona d'absorció de GuHCl i GTC està entre 220-240 nm, i laLa sal de guanidini residual reduirà la proporció d'A260/A230.Tot i que la sal de guanidini residual reduirà la proporció,l'impacte en els experiments aigües avall és realment insignificant.

3. Contaminació per trizol
El component principal de Trizol és el fenol.La funció principal del fenol és lisar les cèl·lules i alliberar proteïnes i substàncies d'àcid nucleic a les cèl·lules.Tot i que el fenol pot desnaturalitzar de manera efectiva les proteïnes, no pot inhibir completament l'activitat de la RNasa.Per tant, s'afegeix a TRIzol 8-hidroxiquinolina, isotiocianat de guanidina, β-mercaptoetanol, etc. per inhibir la RNasa endògena i exògena.
Quan s'extreu l'ARN cel·lular, Trizol pot lisar ràpidament les cèl·lules i inhibir la nucleasa alliberada de les cèl·lules, i el Trizol residual reduirà significativament la proporció d'A260/A230.
Mètode de processament: quan es centrifuga, cal tenir en compte que el fenol de Trizol és fàcilment soluble en la fase aquosa sota condicions de 4 ° i temperatura ambient.

4. Residus d'etanol
L'etanol s'utilitza en el procés final per precipitar l'ADN mentre es dissolen els ions de sal que poden estar units a l'ADN.La longitud d'ona d'absorció de la més altapic d'absorció del'etanol també es troba a 230-240 nm, quetambé reduirà la relació d'A260/A230.
El mètode per evitar residus d'etanol es pot repetir dues vegades durant l'elució final, bufant en elcampana de fumsdurant dos minuts per permetre que l'etanol s'evapori completament abans d'afegir tampó per a l'elució.
Tanmateix, cal saber que la proporció és només un índex d'avaluació de la qualitat de l'ARN.Si les operacions esmentades anteriorment es regulen estrictament, la desviació entre la relació i el rang estàndard no tindrà un gran impacte en els experiments aigües avall.
Productes relacionats:
Kit d'aïllament d'ARN total animal
Kit d'aïllament d'ARN total de plantes
Kit d'aïllament d'ARN total de cèl·lules
Kit d'aïllament d'ARN total de plantes Plus