Kit RT-qPCR directe II
Descripció del kit:
◮El kit RT-qPCR directe, que utilitza Foreasy Reverse Transcriptase i Foreasy HS Taq DNA Polymerase desenvolupat per Foregene, amb un tampó de reacció únic, fa que aquest kit tingui una gran resistència i compatibilitat, i pot provar directament la reacció utilitzant el sistema Foregene Lysis com a plantilla.Aquest kit es pot sol·licitar per al desenvolupament de kits de detecció d'àcids nucleics COVID-19 i altres bacteris patògens.
Descripció
El kit RT-qPCR directe proporciona un tampó RT-qPCR empaquetat per separat, una polimerasa d'ADN Taq Foreasy HS d'alta eficiènciai Foreasy Reverse Transcriptase (MMLV),fent-ho convenient per a la creació de kits de fons i l'ajust del sistema, amb una verificació senzilla.
El kit RT-qPCR directe, que utilitza Foreasy Reverse Transcriptase i Foreasy HS Taq DNA Polymerase desenvolupat per Foregene, amb un tampó de reacció únic, fa que aquest kit tingui una gran resistència i compatibilitat, i pot provar directament la reacció utilitzant el sistema Foregene Lysis com a plantilla.Aquest kit es pot sol·licitar per al desenvolupament de kits de detecció d'àcids nucleics COVID-19 i altres bacteris patògens.
Aquest kit pot ser directament el component del producte IVD, amb facilitat i rapidesa.Només necessita una fàcil verificació, sense tornar a desenvolupar-se.
Especificacions
500T, 50.000T
Components del kit
| Contingut del kit (sistema de reacció de 20 μL) | IM-05111-02 | IM-05112-02 |
| 500 T | 50.000 T | |
| Foreasy Rtranscriptasa inversa (200 U/μL) | 50 μl×1 | 1 ml×5 |
| Foreasy HS Taq DNA polimerasa (5 U/μL) | 100 μl×1 | 1 ml×10 |
| 2 × RT-qPCR directeBuffer | 1 ml × 5 | 500 ml × 1 |
| Instrucció | 1 | 1 |
Etapes de funcionament
A: Prepareu la plantilla i el reactiu
1. Prepareu una plantilla d'ARN preparada (es recomana utilitzar el kit de la sèrie Foregene Total RNA Isolation Kit per extreure i purificar la plantilla d'ARN) o un producte de craqueig de mostres (es recomana utilitzar el sistema Foregene Lysis), cebadors específics (10 μM) i altres consumibles rellevants, instrument.
2. Poseu el tampó RT-qPCR directe 2 ×, ddH2O lliure de RNasa i 20 × colorant de referència ROX (si és necessari) a la caixa amb gel, fent que es fonguin de manera natural i barregeu-los suaument.
B: Preparació del sistema RT-qPCR
Obteniu la meitat del volum del tampó de reacció del sistema de reacció (per exemple, si el volum del sistema és de 20 μL, cal obtenir 10 μL 2× Direct RT-qPCR Buffer). Perquantitat d'enzim corresponent, suggerim queM-MLV: sistema de reacció 10-30 U/20 μL,TaqADN polimerasa：Sistema de reacció 1-2 U/20 μLaquest és el nostre suggeriment, hauríeu de provar-lo i ajustar-lo), afegiu plantilla d'ARN, cebadors i sondes específics i afegiu ddH lliure de RNasa2O a 20 μL.La preparació específica del sistema de reacció RT-qPCR es pot referir a la següent taula 1.
Taula 1: Preparació del sistema RT-qPCR
| Component | Volum | Concentració final |
| 2 × Buffer RT-qPCR directe | 10 μl | 1× |
| Transcriptasa inversa Foreasy (MMLV) | 10-30 U | |
| Foreasy HS Taq DNA polimerasa | 1-2 U | |
| Primer primer (10 μM) | 0,8 μl | 50-900 nM |
| Primer invers (10 μM) | 0,8 μl | 50-900 nM |
| Sonda (4 μM) | 1 μl | 200 nM |
| Plantilla (ARN o lisat) | X μL | |
| 20 × Colorant de referència ROX | - | 1* |
| RNasa-FreeddH2O | (6,4-X) μL | |
| Volum total | 20 μl |
Nota: el cebador directe i el cebador invers són cebadors específics del gen objectiu.El sistema de la qPCR es podria ajustar segons models experimentals i PCR pràctics.Recomanem 400 nM per a la concentració final de la majoria d'imprimadors.Ajusteu el volum d'encebadors i sondes específics segons la concentració preparada i la concentració final recomanada, si us plau.
1*: Seleccioneu la concentració final adequada de colorant de referència ROX segons diferents instruments quantitatius de PCR.La concentració òptima de colorant de referència ROX dels instruments de PCR quantitatius comuns es mostra a la taula següent:
| Instruments de PCR quantitatius | Concentració final de colorant de referència ROX |
| ABI PRISM 7000/7300/7700/7900HT/Step One,etc. | 1× (per exemple, afegiu 1μl 20×ROX Reference Dye en un sistema de reacció de 20 μL) |
| ABI 7500, 7500 Fast, Stratagene Mx3000P, Mx3005P i Mx4000, etc. | 0,5 × (per exemple, afegiu 0,5 μl de colorant de referència 20 × ROX en un sistema de reacció de 20 μl) |
| Instrument PCR Roche, instrument PCR Bio-Rad, instrument PCR quantitatiu Eppendorf, etc. | Sense tint de referència ROX |
Emmagatzematge i vida útil
El kit s'ha d'emmagatzemar a -20 ± 5 ℃.S'ha d'emmagatzemar immediatament a una nevera termostàtica de -20 ℃.El període de validesa és de 2 anys si es conserva en condicions adequades.
