Kit d'aïllament d'ADN d'hisop bucal/targeta FTA Kit d'extracció o purificació d'ADN genòmic a partir de hisopos bucals
Descripció del kit:
Purifiqueu ràpidament l'ADN genòmic d'alta qualitat a partir de mostres de tampons bucals/targeta FTA.
◮Sense contaminació per RNasa:La columna ADN-Only proporcionada pel kit permet eliminar l'ARN de l'ADN genòmic sense afegir RNasa durant l'experiment, evitant que el laboratori sigui contaminat per RNasa exògena.
◮Velocitat ràpida:Foregene Protease té una activitat més alta que proteases similars i digereix mostres de teixit ràpidament;l'operació és senzilla i l'operació d'extracció d'ADN genòmic es pot completar en 20-80 minuts.
◮Convenient:La centrifugació es realitza a temperatura ambient i no hi ha necessitat de centrifugació a baixa temperatura de 4 °C ni de precipitació d'ADN amb etanol.
◮Seguretat:No es requereix extracció de reactius orgànics.
◮Alta qualitat:L'ADN genòmic extret té fragments grans, sense ARN, sense RNasa i un contingut d'ions extremadament baix, que pot complir els requisits de diversos experiments.
◮Sistema de microelució:Pot augmentar la concentració d'ADN genòmic, que és convenient per a la detecció o l'experimentació aigües avall.
Descripció
Aquest kit proporciona un mètode eficient i ràpid per obtenir ADN genòmic d'alta concentració a partir d'hisops bucals i FTA Card (taques de sang).Utilitzant la nostra empresa'La columna i la fórmula única de gir de membrana de sílice només d'ADN, combinades amb Foregene Protease, es pot extreure ADN genòmic d'alta concentració i alta qualitat en 80 minuts.La petita columna de purificació especialment dissenyada uneix l'ADN genòmic i l'ADN es pot eluir amb una petita quantitat (15 μl) sistema d'elució per augmentar la concentració de l'ADN genòmic obtingut, que és convenient per a la detecció o l'experiment aigües avall.El kit pot processar una o més mostres alhora, i el procés de purificació no requereix extracció de substàncies orgàniques com el fenol, el cloroform i la precipitació d'isopropanol o etanol que requereix molt de temps, i l'operació és senzilla i estalvia temps.
Especificacions
50 preparacions
Components del kit
| Buffer ST1 |
| Buffer ST2 |
| Acrilamida lineal |
| Buffer PW |
| Buffer WB |
| Buffer EB |
| Proteasa del gen anterior |
| Columna només d'ADN |
| Instruccions |
Característiques i avantatges
-Sense contaminació per RNasa: la columna només DNA proporcionada pel kit permet eliminar l'ARN de l'ADN genòmic sense afegir RNasa durant l'experiment, evitant que el laboratori estigui contaminat per RNasa exògena.
-Velocitat ràpida: Foregene Protease té una activitat més alta que proteases similars, digereix mostres ràpidament;operació senzilla.
-Convenient: la centrifugació es realitza a temperatura ambient, i no cal una centrifugació a baixa temperatura a 4 °C ni precipitació d'ADN amb etanol.
-Seguretat: no es requereix extracció de reactius orgànics.
-Alta qualitat: l'ADN genòmic extret té fragments grans, sense ARN, sense RNasa i un contingut d'ions extremadament baix, que pot complir els requisits de diversos experiments.
-Sistema de micro-elució: pot augmentar la concentració d'ADN genòmic, que és convenient per a la detecció o l'experimentació aigües avall.
Aplicació del kit
És adequat per a la purificació d'ADN genòmic a partir de les mostres següents: hisops bucals, targeta FTA (taques de sang).
Emmagatzematge i vida útil
-Aquest kit es pot emmagatzemar durant 12 mesos en condicions seques a temperatura ambient (15-25°C);si cal emmagatzemar-lo durant un període de temps més llarg, es pot emmagatzemar a 2-8 °C.
Nota: si s'emmagatzema a baixa temperatura, la solució és propensa a la precipitació.Abans d'utilitzar, assegureu-vos de col·locar la solució al kit a temperatura ambient durant un període de temps.Si cal, preescalfeu-lo en un bany maria a 37 °C durant 10 minuts per dissoldre el precipitat i barregeu-lo abans d'utilitzar-lo.
-Foregene Protease solució té una fórmula única, que és activa quan s'emmagatzema a temperatura ambient durant molt de temps (3 mesos);la seva activitat i estabilitat serà millor quan s'emmagatzema a 4°C, per això es recomana conservar-lo a 4°C, recordeu no mantenir-lo a -20°C.
La columna de purificació està obstruïda
En aquest kit, en l'operació d'extracció d'ADN genòmic, la columna de purificació s'adsorbeix directament a la barreja de lisi enzimàtica de la mostra sense pas de centrifugació, i la columna de purificació es pot bloquejar a causa de l'enzimació incompleta i l'alta viscositat de la mostra.
Les possibles causes següents són les següents:
1. Digestió enzimàtica incompleta de mostres de teixit.
Recomanació: el temps de processament de la mostra de la proteasa Foregene es pot allargar adequadament o es pot prendre el sobrenedant després de la centrifugació a 12.000 rpm (~ 13.400 × g) durant 5 min.
2. Ús excessiu de mostres de teixit o teixits grans.
Recomanació: és millor no superar 1 hisop bucal a la mostra;si la mostra és massa gran, augmenteu la dosi de Buffer ST1, Foregene Protease, tampon ST2 en conseqüència.
3. La viscositat de la mostra és massa alta.
Recomanació: les mostres es poden diluir adequadament amb 10 mM de Tris-HCl abans de l'extracció d'ADN genòmic.
4. S'han xuclat fragments de la targeta de sang.
Recomanació: el temps de centrifugació transitòria del pas 6 de l'extracció genòmica de taques de sang (targeta FTA) es pot ampliar adequadament.
Rendiment baix o sense ADN
Sovint hi ha una varietat de factors que afecten el rendiment de l'ADN genòmic, com ara l'origen de la mostra, les condicions d'emmagatzematge de la mostra, la preparació de la mostra, la manipulació, etc.
L'ADN genòmic no es pot obtenir durant l'extracció
Les possibles causes són les següents:
1. La conservació inadequada de les mostres o l'emmagatzematge durant massa temps condueixen a la degradació de l'ADN genòmic.
Recomanació: Preferiblement, els hisops orals s'han de prendre mostres recents, i no és aconsellable utilitzar hisops conservats per a les operacions d'extracció d'ADN genòmic;Les mostres de taques de sang haurien de garantir que la qualitat sigui qualificada i el temps d'emmagatzematge no hauria de ser massa llarg.
2. Un ús massa baix de teixit pot provocar que no s'extragui l'ADN genòmic corresponent.
Recomanació: seguiu les instruccions de mostreig d'hisop bucal a la guia d'operacions i netegeu tantes vegades com sigui possible de manera que es puguin unir prou cèl·lules a l'escut bucal per a l'extracció d'ADN genòmic;per a l'extracció de mostres de taques de sang, l'àrea de tall de taques de sang es pot augmentar adequadament.
3. La proteasa del gen anterior es conserva de manera inadequada, la qual cosa provoca una disminució de la seva activitat o inactivació.
Recomanació: Confirmeu les condicions d'emmagatzematge de la Proteasa Foregene o substituïu-la per una nova Proteasa Foregene per a la reacció enzimàtica.
4. La conservació inadequada del kit o el temps d'emmagatzematge és massa llarg, cosa que provoca la fallada d'alguns components del kit.
Recomanació: adquireu un nou kit d'aïllament d'ADN amb hisop bucal per a procediments relacionats.
5. El tampó WB no afegeix etanol absolut.
Recomanació: Confirmeu que el tampó WB afegeix el volum correcte d'etanol absolut.
6. L'eluent no s'afegeix correctament a la pel·lícula de silicona.
Recomanació: Afegiu gotes d'eluent preescalfat a 65 °C al centre de la membrana de silicona i deixeu-ho a temperatura ambient durant 5 minuts per augmentar l'eficiència d'elució.
ADN genòmic aïllat de baix rendiment
Les possibles causes següents són les següents:
1. La conservació inadequada de les mostres o l'emmagatzematge durant massa temps condueixen a la degradació de l'ADN genòmic.
Recomanació: els hisops orals es mostren preferiblement recentment, i els hisops conservats no s'han d'utilitzar per a l'extracció d'ADN genòmic.
2. Si la quantitat de mostra de teixit és massa petita, el contingut d'ADN genòmic extret serà menor.
Recomanació: seguiu les instruccions de mostreig d'un hisop oral a la guia d'operació, netejant tantes vegades com sigui possible de manera que es puguin unir suficients cèl·lules a l'hibut oral per a l'extracció d'ADN genòmic.
3. La proteasa del gen anterior es conserva de manera inadequada, la qual cosa provoca una disminució de la seva activitat o inactivació.
Recomanació: Confirmeu les condicions d'emmagatzematge de la Proteasa Foregene o substituïu-la per una nova Proteasa Foregene per a la reacció enzimàtica.
4. Problemes d'eluents.
Recomanació: Utilitzeu el tampó EB per a l'elució;si s'utilitza ddH2O o altres eluents, confirmeu que el pH de l'eluat està entre 7,0-8,5.
5. L'eluït no s'afegeix correctament gota a gota.
Recomanació: Afegiu gotes d'eluint al centre de la membrana de silicona i deixeu-ho a temperatura ambient durant 5 minuts per augmentar l'eficiència d'elució.
6. El líquid d'elució s'acumula massa poc.
Recomanació: Utilitzeu l'eluent per a l'elució de l'ADN genòmic tal com es requereix a les instruccions, com a mínim no menys de 15 μl.
Baixa puresa d'ADN genòmic aïllat
La baixa puresa de l'ADN genòmic pot provocar un fracàs o resultats insatisfactoris dels experiments aigües avall, com ara: els enzims no es poden tallar, la PCR no pot obtenir el fragment genètic d'interès, etc.
Les possibles causes són les següents:
1. Contaminació per heteroproteïnes, contaminació per ARN.
Anàlisi: la columna de purificació no es va rentar amb Buffer PW;la columna de purificació de rentat Buffer PW no es va rentar amb la velocitat centrífuga correcta.
Recomanació: Assegureu-vos que no hi hagi precipitació en el sobrenedant abans d'afegir etanol;assegureu-vos de rentar la columna de purificació segons les instruccions i aquest pas no es pot ometre.
2. Contaminació d'ions impures.
Anàlisi: la columna de purificació de rentat de buffer WB es va ometre o es va rentar només una vegada, donant lloc a una contaminació iònica residual.
Recomanació: assegureu-vos de rentar el tampó WB 2 vegades segons les instruccions per eliminar els ions residuals tant com sigui possible.
3. Contaminació per enzims d'ARN.
Anàlisi: es van afegir RNases estrangeres al tampó;L'operació de rentat del tampó PW era incorrecta, donant lloc a residus de RNasa, afectant les operacions experimentals d'ARN aigües avall, com ara la transcripció in vitro.
Recomanació: els kits d'aïllament d'àcids nucleics de la sèrie Foregene poden eliminar l'ARN sense afegir RNasa addicional, de manera que el kit d'aïllament d'ADN de la targeta de tampons/FTA bucals no cal afegir RNasa;assegureu-vos de seguir les instruccions per a la columna de purificació de rentat Buffer PW i aquest pas no es pot ometre.
4. Residus d'etanol.
Anàlisi: el tampó WB no va realitzar la centrifugació del tub buit després de rentar la columna de purificació.
Recomanació: Realitzeu l'operació correcta de centrifugació del tub buit segons les instruccions.
5. Altres contaminacions per impureses.
Anàlisi: les mostres guardades o les mostres especials no es tracten prèviament.
Recomanació: pretracteu la mostra a fons segons les instruccions.
