(96 pous) Kit QuickEasy Cell Direct RT-qPCR - SYBR Green I
Descripcions
El(96 pous) QuickEasyTM Kit Cell Direct RT-qPCR–SYBR Verd Iproporcionaun sistema tampó de lisi únicto allibera ràpidament l'ARNa partir de cèl·lules cultivadesmostres per a reaccions RT-qPCR, eliminant el temps i laboriósProcés de purificació d'ARN, i només triga 7 minuts a obtenir la plantilla d'ARN necessària.El5 × Direct RT Mixi2 × Direct qPCR Mix-SYBRproporcionat a la caixa pot ràpidament iobtenir eficaçment quantitatius en temps realResultats de la PCR.
5 × Direct RT Mix i 2 × Direct qPCR Mix-SYBR tenen una forta tolerància als inhibidors i poden utilitzar el lisat de la mostra a provar com a plantilla per a una transcripció inversa eficient i una amplificació específica.El reactiu conté la transcriptasa inversa única de Foregene amb alta afinitat per l'ARN, així com l'ADN polimerasa Hot D-Taq, dNTPs, MgCl2 , tampó de reacció, optimitzador i estabilitzador de PCR, i es pot utilitzar juntament amb el tampó de lisi per detectar la mostra de manera ràpida, senzilla i precisa, i té les característiques d'alta sensibilitat, forta especificitat i bona estabilitat.
El kit està dirigit a la lisi de microsistemes de cèl·lules cultivades de 96 pous i té una bona uniformitat i consistència;els components del kit proporcionen 96 reaccions de lisi, 96 reaccions de transcripció inversa i 96 × 2 reaccions qPCR, que poden reunir-se amb la placa de cèl·lules de 96 pous per a un ús únic, evitant la contaminació causada per l'obertura, congelació i descongelació repetides dels reactius i la degradació del rendiment dels reactius.
Components del kit
| Composició del kit ( 50 μL sistema de lisi/20 μlRT sistema de reacció /20μL sistema de reacció qPCR) | DRT-03011 | Observació | |
| 96T | |||
| PartI | BufferCL | 5 ml | Cèl·lulaLisi |
| ForegeneProteasa Plus II | 100 μL | ||
| BufferST | 500 μL | ||
| Part II | ADNGoma d'esborrar | 100 μL | |
| 5 × Direct RT Mix | 400 μL | RT | |
| 2 × mescla directa de qPCR-SYBR | 1 mL × 2 | qPCR | |
| 50 × tint de referència ROX | 400µL | ||
| RNasa- GratuïtddH2 O | 1,7 ml |
| |
| Manual | 1 peça | 1 ració | |
*: El reactiu de lisi DNA Eraser s'inclou a la part II del kit;Els components de lisi cel·lular, RT i qPCR es poden comprar per separat.
Característiques i avantatges
■Simple i eficaç: amb la tecnologia Cell Direct RT, es poden obtenir mostres d'ARN en només 7 minuts.
■ La demanda de mostra és petita, només es poden provar 10 cel·les.
■ Alt rendiment: pot detectar ràpidament ARN en cèl·lules cultivades en plaques de 384, 96, 24, 12 i 6 pous.
■ L'esborrador d'ADN pot eliminar ràpidament els genomes alliberats, reduir en gran mesura l'impacte en els resultats experimentals posteriors.
■ El sistema optimitzat de RT i qPCR fa que la transcripció inversa RT-PCR en dos passos sigui més eficient i la PCR més específica i més resistent als inhibidors de la reacció RT-qPCR.
Aplicació del kit
Àmbit d'aplicació: cèl·lules cultivades.
- ARN alliberat per lisi de mostres: només aplicable a la plantilla RT-qPCR d'aquest kit.
- El kit es pot utilitzar per a les següents finalitats: anàlisi de l'expressió gènica, verificació de l'efecte silenciador gènic mediat per siRNA, cribratge de fàrmacs, etc.
Emmagatzematge i vida útil
La part I d'aquest kit s'ha d'emmagatzemar a les 4℃;La part II s'ha d'emmagatzemar a -20 ℃.
Foregene Protease Plus II s'ha d'emmagatzemar a 4℃, no congeleu a -20 ℃.
Reactiu 2×Direct qPCR Mix-Taqman s'ha d'emmagatzemar a -20℃en la foscor;si s'utilitza amb freqüència, també es pot emmagatzemar a 4℃ per a emmagatzematge a curt termini (utilitzar-lo en un termini de 10 dies).
Principis de disseny d'imprimació de PCR en temps real
Primer i imprimació inversa
Per a la PCR en temps real, el disseny d'imprimació és molt important.Els primers estan relacionats amb l'especificitat i l'eficiència de l'amplificació per PCR i es poden dissenyar amb referència als principis següents:
- Longitud d'imprimació: 18-30 bp.
- Contingut de GC: 40-60%.
- Valor Tm: el programari de disseny d'imprimació, com ara Primer 5, pot donar el valor Tm de la imprimació.Els valors de Tm dels cebadors aigües amunt i aigües avall haurien de ser el més propers possible.També es pot utilitzar la fórmula de càlcul Tm: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).Quan es realitza la PCR, generalment es selecciona una temperatura per sota del valor Tm de l'imprimació de 5 °C com a temperatura de recuit (l'augment corresponent de la temperatura de recuit pot augmentar l'especificitat de la reacció de PCR).
- Primers i productes de PCR:
- La longitud del producte d'amplificació de la PCR del primer disseny és preferiblement de 100-150 pb.
- S'han d'evitar tant com sigui possible les imprimacions de disseny a l'àrea estructural secundària de la plantilla.
- Eviteu la formació de 2 o més bases complementàries entre els extrems 3′ dels cebadors aigües amunt i aigües avall.
- La base terminal del primer 3′ no pot estar present amb 3 G o C consecutius addicionals.
- Els primers en si no poden tenir estructures complementàries, en cas contrari es formarà una estructura de forquilla que afectarà l'amplificació de la PCR.
- L'ATCG s'ha de distribuir de la manera més uniforme possible en la seqüència d'encebadors i s'ha d'evitar la base terminal 3′ com a T.
Apèndix1: Cell DirectRT-qPCR Kit de componentspaquet de suplements t
1. Solució de lisi cel·lular
| Solució de lisi cel·lular | |||
| Components del kit (sistema de lisi de 24 pous/pou) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 T | 500 T | ||
| Partjo | Tampó CL | 20 ml | 100 ml |
| Foregene Protease Plus II | 400 μl | 1 ml × 2 | |
| Tampó ST | 1 ml × 2 | 10 ml | |
| PartII | Esborrador d'ADN | 400 μl | 1 ml × 2 |
| RT Mix | |
| Components del kit (sistema de reacció de 20 μl) | DRT-01011-B1 |
| 200 T | |
| 5 × Direct RT Mix | 800 μl |
| DdH lliure de RNasa2O | 1,7 ml × 2 |
| Barreja de qPCR | ||
| Components del kit (sistema de reacció de 20 μl) | DRT-01021-C1 | DRT-01021-C2 |
| 200 T | 1000 T | |
| 2 × QPCR directe Mix-Taqman | 1 ml × 2 | 1,7 ml × 6 |
| 20 × Colorant de referència ROX | 40 μl | 200 μl |
| DdH lliure de RNasa2O | 1,7 ml | 10 ml |
Manuals d'instruccions:
