Quant saps

Sobre Nextracció d'àcid ucleic

Inici i final de l'àcid nucleic purificat

Tot és difícil al principi, l'àcid nucleic purificat és el més

Iniciació d'experiments moleculars, per a experiments posteriors

L'èxit o el fracàs tenen un impacte crucial.

Molts investigadors científics afavoreixen l'espectrofotòmetre UV de traça/ultratraça perquè pot detectar la concentració d'àcids nucleics i els residus de proteïnes i ions de sal de manera senzilla, ràpida i econòmica.

Com tots sabem, A260 significa valor OD d'absorbància d'àcid nucleic, A280 significa valor OD d'absorbància de concentració de proteïnes, A230 significa valor OD d'absorbància de concentració d'ions de sal, de manera que A260 pot convertir la concentració d'àcid nucleic, A260/280 significa residu de proteïna, A260/230 significa residu d'ions de sal, però això és només una regla basant-se en una gran mesura de la investigació.convencional” per creure que pot explicar la puresa de l'ADN i l'ARNen certa mesura.No és l'únic estàndard per a la identificació del rendiment i la puresa d'àcid nucleic, només s'utilitza com a referència i no és un "estàndard d'or".

El manual de Thermo Fisher ND-2000 posa l'accent en la fiabilitat dels resultats de la prova

La raó és que els resultats obtinguts mitjançant l'ús d'un espectrofotòmetre UV micro/ultramicro només reflecteixen el rendiment i la puresa de l'àcid nucleic des del costat, i hi ha molts factors que influeixen (camí òptic, volum de mostra, concentració de la mostra, valor de pH, altres ions que afecten la mesura de l'absorbància, etc.), el valor OD mesurat no és necessàriament precís.Al mateix temps, a causa de la manca d'especificitat del material de determinació del valor d'absorbància, l'ADN monocatenari, l'ADN de doble cadena, l'ARN, els dNTPs i algunes proteïnes tenen pics d'absorció a una longitud d'ona de 260 nm i la concentració determinada per A260 no és necessàriament l'ADN o ARN real.La concentració, i la seva integritat i degradació no es poden jutjar.

Llavors, com jutjar la qualitat del nostre àcid nucleic purificat?A més d'utilitzar un espectrofotòmetre UV micro/ultramicro per a la detecció, també es requereixen mètodes com l'electroforesi en gel d'agarosa per mostrar visualment la puresa i la integritat de l'àcid nucleic i per indicar la concentració fins a cert punt.D'aquesta manera, el rendiment d'àcid nucleic i la puresa obtinguts a partir dels resultats de detecció de diversos mètodes són creïbles.

Comparació de gràfics experimentals

L'ADN genòmic de les cèl·lules H1299 es va extreure mitjançant els kits d'extracció d'ADN de l'empresa A i es va observar una contaminació important per impureses, donant lloc a alts valors de DO.

(Valor de mesura de DO i electroferograma corresponent)

Índex d'avaluació

Hi ha un "estàndard d'or" per a les proves de qualitat i rendiment d'àcid nucleic?

Pel que sabem, no hi ha un mètode senzill, ràpid i barat.Tant si es tracta d'espectrofotòmetre, d'electroforesi en gel o d'espectrometria de masses, tots reflecteixen la concentració i la puresa de l'àcid nucleic en la solució des de diferents aspectes, i s'han de jutjar fent referència entre si.

El millor índex d'avaluació és semprel'aplicació experimental de seguiment.No afecta l'eficiència de la transcripció inversa i l'amplificació per PCR.L'obtenció de productes d'amplificació i valors de Ct fiables i l'obtenció d'una seqüència completa mitjançant la seqüenciació és una extracció d'àcid nucleic reeixida.

En resum, la visió de la teoria només de la proporció hauria de ser desafiada per la visió d'"utilitzar bons resultats experimentals aigües avall com a bons paràmetres d'extracció"!

Kits d'extracció d'ARN d'ADN Foregene recomanats per obtenir una puresa d'ADN/ARN elevada:

https://www.foreivd.com/reagent/dna-isolation-series/

https://www.foreivd.com/reagent/rna-isolation-series/