Dirigir
ARN llarg no codificant, lncRNA és un ARN no codificant amb una longitud superior a 200 nucleòtids, generalment entre 200-100.000 nt.El lncRNA regula l'expressió gènica a nivells epigenètics, de transcripció i post-transcripcional, i participa en el silenciament del cromosoma X, la impressió del genoma i la modificació de la cromatina, l'activació de la transcripció, la interferència de la transcripció, el transport nuclear, la regulació del cicle cel·lular, la regulació de la diferenciació cel·lular i els efectes de compensació de la dosi (efecte de compensació de la dosi) i moltes altres malalties relacionades amb el desenvolupament humà. els punts calents en el camp de la biomedicina.
01 Tipus i característiques de LncRNA
El lncRNA es divideix en molts tipus segons les diferents fonts de la seva formació, tal com es mostra a la figura anterior.Té les següents característiques:
1. Els lncRNA solen ser més llargs, amb expressió dinàmica i diferents mètodes d'empalmament durant la diferenciació
2. En comparació amb els gens codificants, el lncRNA sol tenir un nivell d'expressió més baix
3. La majoria dels lncRNA tenen una especificitat d'expressió temporal i espacial evident en el procés de diferenciació i desenvolupament dels teixits
4. Hi ha expressions característiques en tumors i altres malalties
5. Les localitzacions subcel·lulars de lncRNA són diverses
6. La seqüència té poca conservació, però la funció té un cert grau de conservació, etc.
02 Preguntes freqüents sobre la transcripció inversa de LncRNA
A causa del baix contingut de lncRNA a les cèl·lules, la llarga longitud i l'estructura d'alt nivell, aquest ARN sovint té estructures complexes com ara bucles de tija o forquillas, i la RT-qPCR és propensa a problemes de transcripció inversa sense èxit o baixa eficiència.
03 Solució de transcripció inversa de LncRNA
En la regla central, el procés dels virus d'ARN que utilitzen la seva pròpia transcriptasa inversa per sintetitzar ADN utilitzant l'ARN com a plantilla s'anomena transcripció inversa.El procés d'utilitzar la transcriptasa inversa del virus d'ARN per sintetitzar la plantilla d'ADNc in vitro s'anomena transcripció inversa.Els principals elements inclosos en el sistema de transcripció inversa: plantilla d'ARN, transcriptasa inversa, cebadors i altres components.
1. Plantilla d'ARN
La influència de la plantilla d'ARN en la transcripció inversa es reflecteix en la seva estructura, puresa i integritat.Com més gran sigui la puresa i la integritat de l'ARN extret, més alta serà l'eficiència de la transcripció inversa i més precisos són els resultats quantitatius posteriors.L'ARN purificat mitjançant reactius d'extracció d'ARN d'ús habitual conté sovint residus d'alcohol i sals de guanidina, que tenen un fort efecte inhibidor sobre la majoria de la transcriptasa inversa.
2.Transcriptasa inversa
La transcriptasa inversa té una influència clau en tot el sistema de transcripció inversa.La temperatura adequada per a la transcriptasa inversa utilitzada a la majoria de laboratoris és generalment de 42 °C.De fet, l'obertura de l'estructura d'ARN d'alt nivell requereix una temperatura més alta i els requisits per a la transcriptasa inversa són més alts.
3.Primer
Els cebadors de transcripció inversa inclouen cebadors específics de gens, cebadors aleatoris i cebadors Oligo dT.La majoria dels lncRNAs no contenen cues de poliA, i és important fer coincidir correctament els primers aleatoris amb Oligo dT.
4.Altres components
Atès que l'ARN és especialment fàcil de degradar, es pot minimitzar la introducció de components en el sistema de transcripció inversa, cosa que pot prevenir eficaçment l'entrada de RNasa i garantir el bon progrés de la transcripció inversa.
Foregens'obté de la plantilla d'ARN, transcripció inversa a qPCR
Escolteu completament la vostra detecció de lncRNA
ARN total animal IsolamentKit (amb columna d'eliminació d'ADNg)
ARN total cel·lular IsolamentKit (amb columna d'eliminació d'ADNg)
Lnc-RT HeroTM I (amb gDNasa) (Super Premix per a la síntesi d'ADNc de la primera cadena a partir de lncRNA)
PCR en temps real EasyTM-SYBR Green I
Aavantatges ofExtracció d'ARN:
El kit utilitza la tecnologia d'extracció d'ARN de tercera generació, sense necessitat d'utilitzar DNasa.
11 minuts de cèl·lules cultivades en plaques de 96, 24, 12 i 6 pous, extracció d'alta eficiència d'ARN cel·lular total d'alta puresa i alta qualitat sense gDNA.
Avantatges de la transcripció inversa de lncRNA:
Un sistema de transcripció inversa desenvolupat especialment per a LncRNA per eliminar ràpidament la contaminació de l'ADN genòmic.
El sistema de transcripció inversa té una alta estabilitat tèrmica i encara té un bon rendiment de transcripció inversa a 50 ° C.
Les plantilles amb un alt contingut de GC i una estructura secundària complexa es poden revertir amb alta eficiència.
Avantatgesof qPCR:
Foregene Taq Polymerase d'arrencada en calent té una eficiència d'amplificació més alta, una sensibilitat d'amplificació més alta i una especificitat d'amplificació més alta
La Real PCR Easy Mix optimitzada fa que SYBR Green I tingui una sensibilitat de detecció més alta i la seva intensitat de fluorescència sigui de 3 a 5 vegades la de productes similars, que poden satisfer les necessitats de diferents tipus d'experiments quantitatius de fluorescència.
Hora de publicació: 23-jul-2021
