Construcció del sistema SOP

Establir un SOP de l'experiment de PCR per estandarditzar el comportament del personal de l'experiment.

Els experimentadors compleixen estrictament els procediments operatius i minimitzen la contaminació per PCR que pot ser causada per factors humans o eviten l'aparició de contaminació en l'operació.A més, l'experimentador ha de tenir els coneixements i habilitats professionals corresponents, inclosa la competència en operar equips relacionats, aclarir tot el procés de treball, dominar els mètodes de tractament de la contaminació i els mètodes de control de qualitat del laboratori i ser capaç d'interpretar correctament els resultats de les proves.

Building Standard PCR Laboratory

El laboratori de PCR es divideix en principi en quatre àrees, a saber, l'àrea de preparació de reactius, l'àrea de processament de mostres, l'àrea d'amplificació i l'àrea d'anàlisi de productes d'amplificació.Les dues primeres àrees són àrees de pre-amplificació, i les dues últimes àrees són àrees de post-amplificació.La zona de pre-amplificació i la zona de post-amplificació s'han de separar estrictament.Els materials experimentals, reactius, paper d'enregistrament, bolígrafs, materials de neteja, etc. només poden fluir de l'àrea de pre-amplificació a l'àrea de post-amplificació, és a dir, des de l'àrea de preparació de reactius, àrea de processament de mostres, àrea d'amplificació i àrea d'anàlisi del producte d'amplificació, i no han de fluir en sentit invers.El flux d'aire al laboratori també ha de fluir des de l'àrea de pre-amplificació a l'àrea de post-amplificació, no en sentit invers.

Reduir els passos experimentals

Si el laboratori només realitza la detecció i identificació per PCR, es recomana utilitzar la PCR quantitativa fluorescent en lloc de la PCR convencional.

Els resultats de la detecció quantitativa de PCR de fluorescència es poden recollir i analitzar mitjançant senyals fluorescents, de manera que no cal obrir la tapa per a l'electroforesi després de la reacció, la qual cosa evita la contaminació dels productes de PCR causada per la fuita de productes de reacció per formar aerosols.Si augmenteu el nombre d'obertures de tapa durant l'etapa de càrrega de l'electroforesi en gel, és probable que es produeixi contaminació per aerosol.Es recomana promoure l'aplicació de la PCR quantitativa i substituir gradualment la PCR qualitativa.

Adoptar el sistema anticontaminació UNG

El sistema de contaminació de productes anti-PCR UNG s'utilitza per a la reacció de PCR.

El sistema utilitza dUTP en lloc de dTTP.Després de la reacció de PCR, tots els productes de PCR (fragments d'ADN) s'incorporen amb dUTP;a la següent ronda de reacció de PCR, l'enzim UNG afegit al sistema s'incuba a 37 ° C durant 5 minuts abans de la PCR, que pot ser específica Degradar tots els fragments d'ADN que contenen dUTP i, a continuació, realitzar la reacció de PCR.Això pot eliminar completament la contaminació dels aerosols causada pels productes de PCR.L'efecte es mostra a la figura següent:

Nota: per a la sèrie PCR directa, podeu triar els productes de la sèrie del sistema de contaminació de productes anti-PCR de FJ Biotech

Suggereix

Per als laboratoris que realitzen proves de genotipat a gran escala, es recomana fer servir el sistema de contaminació de productes anti-PCR UNG per provar reactius a més de la construcció de laboratoris raonables.

Recordatori: l'ús d'aquest sistema no pot eliminar la contaminació del producte PCR que ja s'ha produït.Per tant, el sistema UNG s'ha d'utilitzar al començament de la prova corresponent i el sistema UNG sempre s'ha d'utilitzar per a l'amplificació de PCR, per evitar la contaminació dels productes de PCR.Fals positiu.

Es recomana utilitzar el sistema Direct PCR-UNG de Forge Biotech quan es realitzen proves a gran escala, com ara: Plant Leaf Direct PCR Kit-UNG;

Plant Seed Direct PCR Kit-UNG;

Kit de PCR directe de teixit animal-UNG;

Mouse Tail Direct PCR Kit-UNG;

Zebra Fish Direct PCR Kit-UNG.

Aquesta sèrie de kits de Foregene no només pot realitzar la detecció de PCR de manera ràpida i a gran escala, sinó que també pot prevenir i controlar eficaçment la contaminació del producte PCR.