Establir un SOP de l'experiment de PCR per estandarditzar el comportament del personal de l'experiment.
L'experimentador compleix estrictament els procediments operatius i minimitza la contaminació per PCR que pot ser causada per factors humans o evita l'aparició de contaminació.A més, l'experimentador ha de tenir els coneixements i habilitats professionals corresponents, inclosa la competència en operar equips relacionats, aclarir tot el procés de treball, dominar els mètodes de tractament de la contaminació i els mètodes de control de qualitat del laboratori i ser capaç d'interpretar correctament els resultats de les proves.
Establir un laboratori estàndard de PCR.
El laboratori de PCR es divideix en principi en quatre àrees, és a dir, l'àrea de preparació de reactius, l'àrea de processament de mostres, l'àrea d'amplificació i l'àrea d'anàlisi de productes d'amplificació.Les dues primeres àrees són àrees de pre-amplificació, i les dues últimes àrees són àrees de post-amplificació.La zona de pre-amplificació i la zona de post-amplificació s'han de separar estrictament.Els materials experimentals, reactius, paper d'enregistrament, bolígrafs, materials de neteja, etc., només poden fluir de l'àrea de pre-amplificació a l'àrea de post-amplificació, és a dir, des de l'àrea de preparació de reactius → àrea de processament de mostres → àrea d'amplificació → àrea d'anàlisi del producte d'amplificació, i no han de fluir cap enrere.El flux d'aire al laboratori també ha de fluir des de l'àrea de pre-amplificació a l'àrea de post-amplificació, i no cap enrere.El disseny ideal del laboratori de PCR es mostra a continuació:
Figura A: Mode de configuració de laboratori de PCR ideal amb pressió negativa a la sala de tampó
Figura B: Mode de configuració de laboratori de PCR ideal amb pressió positiva a la sala tampó
Els diagrames de configuració del laboratori de PCR que es mostren a la figura A i la figura B haurien de ser un mode de configuració més ideal, i el laboratori amb condicions pot fer referència a aquest mode per al disseny.Per als laboratoris normals, es recomana que l'àrea d'amplificació de la PCR i l'àrea d'anàlisi del producte es puguin separar, i l'obertura de la coberta s'ha de reduir tant com sigui possible a l'àrea de preparació de la mostra i a l'àrea d'amplificació de la PCR.Recordeu: els productes i subministraments experimentals de l'àrea d'anàlisi de productes estan estrictament prohibits a l'àrea de preparació de mostres i a l'àrea d'amplificació de PCR.
Si el laboratori només realitza la detecció i identificació per PCR, es recomana utilitzar la PCR quantitativa fluorescent en lloc de la PCR convencional.
Els resultats de la detecció quantitativa de PCR de fluorescència es poden recollir i analitzar mitjançant senyals de fluorescència, de manera que no cal obrir la tapa per a l'electroforesi després de la reacció, la qual cosa evita la contaminació del producte de PCR causada per la fuita de productes de reacció per formar aerosols.Si augmenteu el nombre d'obertures de tapa durant l'etapa de càrrega de l'electroforesi en gel, és probable que es produeixi contaminació per aerosol.Es recomana promoure l'aplicació de la PCR quantitativa i substituir gradualment la PCR qualitativa.
El sistema de contaminació de productes anti-PCR UNG s'utilitza per a la reacció de PCR.
El sistema utilitza dUTP en lloc de dTTP.Després de la reacció de PCR, tots els productes de PCR (fragments d'ADN) s'incorporen amb dUTP;a la següent ronda de reacció de PCR, l'enzim UNG afegit al sistema s'incuba a 37 ° C durant 5 minuts abans de la PCR, que pot degradar específicament tots els fragments d'ADN que contenen dUTP i, a continuació, realitzar la reacció de PCR.Això pot eliminar completament la contaminació dels aerosols causada pels productes de PCR.L'efecte es mostra a la figura següent:
Nota: per a la sèrie PCR directa, podeu triar els productes de la sèrie del sistema de contaminació de productes anti-PCR de ForegeneSuggereix
Per als laboratoris que realitzen proves de genotipat a gran escala, es recomana fer servir el sistema de contaminació de productes anti-PCR UNG per provar reactius a més de la construcció de laboratoris raonables.
Recordatori: l'ús d'aquest sistema no pot eliminar la contaminació del producte PCR que ja s'ha produït.Per tant, el sistema UNG s'ha d'utilitzar al començament de la prova corresponent i el sistema UNG s'ha d'utilitzar per a l'amplificació de PCR, per evitar la contaminació dels productes de PCR Fals positius.
Es recomana utilitzar el sistema Direct PCR-UNG de Foregene quan es realitzen proves a gran escala, com ara:
Plant Leaf Direct PCR Kit-UNG;
Plant Seed Direct PCR Kit-UNG;
Kit de PCR directe de teixit animal-UNG;
Mouse Tail Direct PCR Kit-UNG;
Zebra Fish Direct PCR Kit-UNG.
Aquesta sèrie de kits de Foregeneno només pot realitzar la detecció de PCR de manera ràpida i a gran escala, sinó que també pot prevenir i controlar eficaçment la contaminació del producte PCR.
Hora de publicació: 19-mar-2021
