W: Germà, s'ha completat la transcripció inversa i, finalment, l'últim pas: PCR quantitativa fluorescent!Ei, germà, què és la PCR quantitativa en temps real?
M: PCR sempre ho saps, oi?
W: Ja saps, la PCR és la reacció en cadena de la polimerasa, i és una tecnologia que augmenta l'ADN!
M: És gairebé... És un mètode tècnic per amplificar la seqüència diana a més d'un milió de vegades mitjançant cebadors específics, però això només indica la presència o absència de la seqüència diana, i no pot determinar la quantitat de la plantilla inicial.La PCR quantitativa de fluorescència és un mètode tècnic desenvolupat per resoldre aquest problema.La PCR en temps real i la PCR quantitativa (qPCR) s'hi refereixen generalment.
W: La diferència amb la PCR ordinària rau en la quantificació de la fluorescència?
M: Sí, és a dir, en l'etapa d'extensió de cada cicle de PCR, es detecta la intensitat del senyal de fluorescència i es pot calcular la quantitat inicial de plantilla segons el canvi de la intensitat del senyal.
W: Se sent tan complicat!Ho he de calcular jo mateix?
M: Això requereix que aprengueu lentament, el millor és poder entendre el principi.Ara podeu centrar-vos primer en el valor CT, que són dades experimentals relativament intuïtives, i la seva mida correspon a la mida de la quantitat inicial de la plantilla.També hi ha gràfics com les corbes d'amplificació i les corbes de fusió.Tenen l'última paraula sobre si el vostre experiment té èxit o no.
W: Oh, germà.Llavors faré l'experiment de qPCR!
M: Presteu especial atenció a no afegir plantilles a l'àrea de reactius, en cas contrari, la vostra barreja no utilitzada es contaminarà fàcilment!
W: Entenc!

Kit PCR en temps real Easyᵀᴹ-SYBR Green I

Més eficiència, major especificitat
Alta sensibilitat, bona compatibilitat