La característica destacada de la reacció PCR és la seva gran capacitat d'amplificació i una sensibilitat extremadament alta.Per tal de millorar el rendiment de la PCR i l'eficiència de detecció, ens comprometem a millorar la capacitat d'amplificació de la PCR i la sensibilitat de detecció, però el mal de cap està en procés de l'experiment.Sovint es produeixen falsos positius i una quantitat molt petita de contaminació creuada de mostres o contaminació del producte de PCR pot provocar falsos positius a l'experiment.
Cinc tipus de contaminació del producte PCR
Hi ha moltes raons per a la contaminació per PCR, que es poden dividir aproximadament en les següents categories:
La contaminació de la mostra és causada principalment per la contaminació del recipient per recollir la mostra, o quan es col·loca la mostra, es filtra fora del recipient a causa d'un segellat solt, o l'exemplar s'adhereix a l'exterior del recipient, la qual cosa provoca contaminació creuada;La contaminació condueix a la contaminació entre els exemplars;alguns exemplars microbians, especialment els virus, es poden propagar amb aerosols o formar aerosols, donant lloc a una contaminació mútua.
El motiu principal és que durant la preparació dels reactius de PCR, la pistola de mostres, el recipient, l'aigua destil·lada doble i altres solucions estan contaminades per la plantilla d'àcid nucleic de PCR.
Als laboratoris de biologia molecular i alguns laboratoris que utilitzen plasmidis clonats com a controls positius, també és freqüent el problema de la contaminació amb plasmidis clonats.Com que el contingut del plasmidi de clonació en volum unitari és bastant alt i es necessiten més eines i reactius en el procés de purificació, i és molt probable que el plasmidi de les cèl·lules vives estigui contaminat a causa de la forta capacitat de creixement i reproducció de les cèl·lules vives.
La contaminació dels productes amplificats és el problema de contaminació més comú en les reaccions de PCR.Com que la quantitat de còpies del producte de PCR és gran (generalment 1013 còpies/ml), que és molt superior al límit del nombre de còpies de detecció de PCR, una quantitat molt petita de contaminació del producte de PCR pot provocar falsos positius.
La contaminació per aerosol és la forma més probable de contaminació dels productes de PCR, i també és la més fàcil de passar per alt.Està format per la fricció entre la superfície líquida i l'aire.En general, la contaminació d'aerosols es pot formar quan s'obre la tapa, quan s'aspira la mostra o fins i tot quan el tub de reacció s'agita amb força.Segons els càlculs, una partícula d'aerosol pot contenir 48.000 còpies, per la qual cosa la contaminació que provoca és un problema que mereix una atenció especial.
En particular, els laboratoris de proves solen utilitzar el mateix parell d'encebadors per provar un determinat gen.Amb el temps, es produirà una gran quantitat de contaminació del producte PCR a l'espai del laboratori.Un cop es produeix aquesta contaminació, és difícil eliminar-la en poc temps.
Per als tres primers tipus de contaminació, podem utilitzar mitjans efectius per evitar-los, però la contaminació causada pels productes de PCR és difícil de prevenir, especialment en la construcció de laboratoris de PCR no estàndard.En el procés de PCR, quan la punta de la pipeta xucla i bufa el líquid i s'obre la coberta del tub de PCR, es formarà un aerosol.Les molècules d'ADN transportades per l'aerosol (un aerosol pot transportar desenes de milers d'ADN) són difícils d'eliminar perquè suren a l'aire.Un cop s'introdueixi la següent ronda d'experiments de PCR, inevitablement es produiran falsos positius.
Com es mostra a la figura següent, el control negatiu també va amplificar la banda d'interès corresponent:
Aquí s'introdueix la primera part d'aquest tema de la contaminació i la prevenció per PCR.El proper número us portarà la segona part "Prevenció de la contaminació de productes de PCR", així que estigueu atents!
Hora de publicació: 25-jul-2017
