Kit d'aïllament d'ADN i ARN viral Kits de preparació de purificació d'extracció d'ADN i ARN viral
Especificacions
50 preparacions, 200 preparacions
El kit d'aïllament d'extracció d'extracció d'àcids nucleics d'ARN viral utilitza la columna giratòria i la fórmula desenvolupades per Foregene, que pot extreure eficientment ARN viral d'alta puresa i alta qualitat de mostres com ara plasma, sèrum, fluid corporal lliure de cèl·lules i sobrenedant de cultiu cel·lular.El kit afegeix específicament acrilamida lineal, que pot capturar fàcilment petites quantitats d'ARN de les mostres.La columna només ARN pot unir l'ARN de manera eficient.El kit pot processar un gran nombre de mostres al mateix temps.
Tot el kit no conté RNasa, de manera que l'ARN purificat no es degradarà.El tampó viRW1 i el tampó viRW2 poden garantir que l'àcid nucleic viral obtingut estigui lliure de proteïnes, nucleases o altres impureses, que es poden utilitzar directament per a experiments de biologia molecular aigües avall.
Components del kit
| Acrilamida lineal |
| Buffer DRL |
| Buffer RW1, Buffer RW2 |
| DdH lliure de RNasa2O |
| Columna ADN/ARN |
| Instruccions |
Característiques i avantatges
■ Funcionament a temperatura ambient (15-25 ℃) durant tot el procés, sense bany de gel i centrifugació a baixa temperatura.
■ Kit complet sense RNases, no cal preocupar-se per la degradació de l'ARN.
■ Alt rendiment d'àcid nucleic: la columna només d'ADN/ARN i la fórmula única poden purificar l'ADN i l'ARN de manera eficient.
■ Gran capacitat de processament de mostres: es poden processar mostres de fins a 200μl cada vegada.
■ Velocitat ràpida: fàcil d'utilitzar i es pot completar en 20 minuts.
■ Seguretat: no es requereix cap reactiu orgànic.
■ Alta qualitat: els fragments d'ARN purificats són d'alta puresa, lliures de proteïnes i altres impureses i poden satisfer diverses aplicacions experimentals posteriors.
Aplicació del kit
És adequat per a l'extracció i purificació d'àcid nucleic viral en mostres com plasma, sèrum, fluid corporal lliure de cèl·lules i sobrenedant de cultiu cel·lular.
Flux de treball
Diagrama
Emmagatzematge i vida útil
■ Aquest kit es pot emmagatzemar durant 24 mesos en condicions seques a temperatura ambient (15-25 ℃);si s'ha d'emmagatzemar durant més temps, es pot emmagatzemar entre 2 i 8 ℃.
■ La solució lineal d'acrilamida es pot emmagatzemar a temperatura ambient durant 7 dies;després de rebre el kit, traieu-lo i guardeu-lo a -20 °C.
■ Després d'afegir acrilamida lineal al buffer DRL, es pot emmagatzemar a 2-8 °C fins a 48 h.Si us plau, utilitzeu la solució ja feta.
Guia d'anàlisi de problemes
El següent és una anàlisi dels problemes que es poden trobar en l'extracció d'ADN/ARN viral, amb l'esperança de ser útils per als vostres experiments.A més, per a altres problemes experimentals o tècnics que no siguin les instruccions d'operació i l'anàlisi de problemes, tenim un suport tècnic dedicat per ajudar-vos.Si teniu alguna necessitat, poseu-vos en contacte amb nosaltres: 028-83360257 o correu electrònic:
Tech@foregene.com.
No hi ha extracció d'àcid nucleic o baix rendiment d'àcid nucleic
Normalment hi ha molts factors que afecten l'eficiència de la recuperació, com ara: contingut d'àcid nucleic de la mostra, mètode d'operació, volum d'elució, etc.
Anàlisi de causes comunes:
1. Durant el procediment es va realitzar un bany de gel o una centrifugació a baixa temperatura (4 °C).
Suggeriment: Operar a temperatura ambient (15-25°C) durant tot el procés, no banyar-se amb gel i centrifugar a baixa temperatura.
2. La mostra s'ha emmagatzemat de manera incorrecta o la mostra s'ha emmagatzemat massa temps.
Recomanació: emmagatzemar les mostres a -80 °C i evitar la congelació i descongelació repetida;intenteu utilitzar mostres acabades de recollir per a l'extracció d'àcids nucleics.
3. Lisi insuficient de la mostra.
Recomanació: assegureu-vos que la mostra i la solució de treball de lisi es barregen a fons i s'incuben a temperatura ambient (15-25 °C) durant 10 minuts.
4. Addició incorrecta d'eluent.
Suggeriment: assegureu-vos que el ddH2O lliure de RNasa s'afegeix gota a gota al centre de la membrana de la columna de purificació i no el deixeu caure a l'anell de la columna de purificació.
5. No es va afegir el volum correcte d'etanol absolut al tampó RW2.
Suggeriment: seguiu les instruccions, afegiu el volum correcte d'etanol absolut a Buffer RW2 i barregeu bé abans d'utilitzar el kit.
6. Volum de mostra inadequat.
Suggeriment: es processen 200 µl de mostra per cada 500 µl de Buffer DRL.Un processament excessiu de la mostra donarà lloc a un menor rendiment d'extracció d'àcids nucleics.
7. Volum d'elució inadequat o elució incompleta.
Recomanació: el volum d'eluent de la columna de purificació és de 30-50μl;si l'efecte d'elució no és satisfactori, es recomana allargar el temps a temperatura ambient després d'afegir ddH2O sense RNasa preescalfat, com ara 5-10 minuts.
8. L'etanol queda a la columna després del rentat amb el tampó RW2.
Suggeriment: si l'etanol queda després de la centrifugació amb el tampó RW2 durant 2 minuts, la columna es pot col·locar a temperatura ambient durant 5 minuts després de la centrifugació per eliminar completament l'etanol residual.
L'àcid nucleic purificat es degrada
La qualitat de l'àcid nucleic purificat està relacionada amb la conservació de la mostra, la contaminació de la RNasa, el funcionament i altres factors.Anàlisi de causes comunes:
1. Les mostres recollides no es van emmagatzemar a temps.
Suggeriment: si la mostra no s'utilitza a temps després de la recollida, emmagatzemeu-la immediatament a -80 °C a baixa temperatura.Per a l'extracció d'ARN, proveu d'utilitzar mostres acabades de recollir.
2. Recollir mostres i congelar i descongelar repetidament.
Suggeriment: Eviteu la congelació i descongelació (no més d'una vegada) durant la recollida i l'emmagatzematge de mostres, en cas contrari el rendiment d'àcid nucleic es reduirà.
3. S'introdueix la RNasa a la sala d'operacions o no es porten guants d'un sol ús, mascaretes, etc.
Recomanació: els experiments d'extracció d'ARN es realitzen millor en una sala d'operacions d'ARN independent i la taula de laboratori s'ha de netejar abans de l'experiment.
Utilitzeu guants i màscares d'un sol ús durant l'experiment per evitar la degradació de l'ARN causada per la introducció de RNasa en la major mesura.
4. El reactiu es va contaminar amb RNasa durant l'ús.
Recomanació: substituïu-lo per un nou kit d'aïllament d'ADN/ARN viral per a experiments relacionats.
5. Els tubs de centrífuga i les puntes de pipeta utilitzats per a la manipulació de l'ARN estan contaminats amb RNasa.
Suggeriment: assegureu-vos que els tubs de centrífuga, les puntes de les pipetes, les pipetes, etc. utilitzats per a l'extracció d'ARN no contenen RNases.
L'àcid nucleic purificat afecta els experiments aigües avall
L'ADN i l'ARN purificats per la columna de purificació, si el contingut d'ions de sal i proteïnes és massa alt, afectarà els experiments posteriors, com ara: amplificació per PCR, transcripció inversa, etc.
1. L'ADN i l'ARN eluïts tenen ions de sal residuals.
Suggeriment: assegureu-vos que s'afegeix el volum correcte d'etanol absolut al buffer RW2 i renteu la columna de purificació dues vegades a la velocitat de centrifugació especificada a les instruccions d'operació;Realitzeu una centrifugació per minimitzar la contaminació d'ions de sal.
2. L'ADN i l'ARN eluïts tenen residus d'etanol.
Suggeriment: després de confirmar el rentat amb Buffer RW2, realitzeu la centrifugació del tub buit a la velocitat de centrifugació a les instruccions d'operació;si encara hi ha residus d'etanol, podeu centrifugar el tub buit i després posar-lo a temperatura ambient durant 5 minuts per eliminar el residu d'etanol al màxim.
Manuals d'instruccions:
Manual d'instruccions del kit d'aïllament d'ADN i ARN viral
