Guia d'anàlisi de problemes

The following is an analysis of the problems that may be encountered in the extraction of plant genomic DNA, hoping to be helpful to your experiments. In addition, for other experimental or technical problems other than operation instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us: 028-83360257 or E-mali: Tech@foregene.com.

Rendiment baix o sense ADN

En general, hi ha molts factors que afecten el rendiment de l'ADN genòmic, incloent la font de la mostra, l'edat de la mostra, les condicions d'emmagatzematge de la mostra i l'operació.

L'ADN genòmic no es va poder obtenir durant l'extracció

1. Les mostres de teixit s'emmagatzemen de manera incorrecta o s'emmagatzemen durant massa temps, donant lloc a la degradació de l'ADN genòmic.

Recomanació: Emmagatzemar mostres de teixit en nitrogen líquid o -20°C;intenteu utilitzar mostres recentment recollides per a l'extracció d'ADN genòmic.

2. La quantitat de mostra massa escassa pot provocar que no s'extregui l'ADN genòmic corresponent.

Suggeriment: per a mostres de teixit que s'han emmagatzemat durant molt de temps o que tenen una degradació severa de l'ADN genòmic, la quantitat de mostres de teixit es pot augmentar adequadament per extreure un ADN genòmic considerable.La quantitat de la mostra es pot determinar segons les necessitats d'ADN, però la mostra fresca no ha de superar els 100 mg i la mostra seca no ha de superar els 30 mg.

3. La mostra no es tritura amb nitrogen líquid ni es col·loca massa temps després del nitrogen líquid.

Suggeriment: durant l'extracció d'ADN, la mostra s'ha de triturar completament amb nitrogen líquid per trencar la paret cel·lular;després de la mòlta, transferiu la mostra en pols a PL1 preescalfat a 65°C tan aviat com sigui possible (un cop fos la pols mòlta, l'ADN genòmic començarà a degradar-se ràpidament).

4. L'emmagatzematge inadequat de la Proteasa Foregene provoca una activitat reduïda o inactivada.

Recomanació: Confirmeu les condicions d'emmagatzematge de Foregene Protease o substituïu-la per una nova Foregene Protease per a la hidròlisi enzimàtica.

5. El kit s'emmagatzema incorrectament o s'emmagatzema durant massa temps, cosa que fa que alguns components del kit fallin.

Recomanació: comprar un nou kit d'extracció d'ADN genòmic de plantes per a operacions relacionades.

6. Ús inadequat del kit.

Suggeriment: Adquirir un kit d'aïllament d'ADN vegetal dedicat a mostres per a l'extracció i purificació d'ADN genòmic vegetal.

7. Tampoc WB sense afegir anhidre etanol.

Recomanació: assegureu-vos d'afegir el volum correcte d'etanol absolut al buffer WB.

8. L'eluent no es va degotejar correctament sobre la membrana de sílice.

Suggeriment: afegir l'eluent preescalfat a 65℃gota a gota al centre de la membrana de gel de sílice i deixeu-la a temperatura ambient durant 5 minuts per augmentar l'eficiència d'elució.

Extracció per obtenir ADN genòmic de baix rendiment

1. La mostra s'emmagatzema de manera inadequada o s'emmagatzema durant massa temps, la qual cosa provoca la degradació de l'ADN genòmic.

Recomanació: emmagatzemar mostres de teixit a -20℃;intenteu utilitzar mostres de teixit recentment recollides per a l'extracció d'ADN genòmic.

2. Si la quantitat de mostres de teixit és massa petita, l'ADN genòmic extret serà menor.

Suggeriment: Algunes mostres de plantes són riques en aigua, com les plantes aquàtiques com les algues, etc., la dosi es pot augmentar adequadament o l'aigua es pot deshidratar una mica abans de l'operació.

3. Les mostres no es van mòltar a fons amb nitrogen líquid o es van deixar a temperatura ambient durant massa temps després de la mòlta.

Suggeriment: la mòlta de nitrogen líquid ha de ser suficient i la paret cel·lular de la mostra s'ha de trencar tant com sigui possible;immediatament després de la mòlta, la mostra en pols s'ha de transferir a 65℃tampó preescalfat PL1 per al següent pas.

4. No utilitzar el kit correcte.

Recomanació: utilitzeu un kit d'aïllament d'ADN vegetal dedicat per extreure i purificar l'ADN genòmic de les plantes.

5. L'emmagatzematge inadequat de la Proteasa Foregene provoca una activitat reduïda o inactivada.

Recomanació: Confirmeu les condicions d'emmagatzematge de Foregene Protease o substituïu-la per una nova Foregene Protease per a la hidròlisi enzimàtica.

6. Problema de l'eluent

Recomanació: utilitzeu el tampó EB per a l'elució;si s'utilitza ddH₂O o altres eluents, assegureu-vos que el pH de l'eluent estigui entre 7,0 i 8,5.

7. L'eluent no es degota correctament

Suggeriment: si us plau, afegiu la gota d'elució al centre de la membrana de sílice i deixeu-la a temperatura ambient durant 5 minuts per augmentar l'eficiència d'elució.

8. El volum de l'eluent és massa petit

Suggeriment: si us plau, utilitzeu l'eluent per a l'elució de l'ADN genòmic segons les instruccions, com a mínim no menys de 100μl.

ADN genòmic extret amb baixa puresa

La baixa puresa de l'ADN genòmic conduirà al fracàs o al mal efecte dels experiments aigües avall, com ara: l'enzim no es pot tallar i el fragment del gen objectiu no es pot obtenir per PCR.

1. Contaminació per proteïnes diverses, contaminació per ARN.

Anàlisi: el tampó PW no es va utilitzar per rentar la columna;El tampó PW no es va utilitzar per rentar la columna a la velocitat de centrifugació correcta.

Suggeriment: procurar que no hi hagi precipitació en el sobrenedant quan el sobrenedant passa per la columna;assegureu-vos de rentar la columna de purificació amb Buffer PW segons les instruccions, i aquest pas no es pot ometre.

2. Contaminació d'ions impures.

Anàlisi: la columna de rentat Buffer WB es va ometre o només es va rentar una vegada, donant lloc a una contaminació iònica residual.

Recomanació: assegureu-vos de rentar dues vegades amb Buffer WB segons les instruccions per eliminar els ions residuals tant com sigui possible.

3. Contaminació per RNasa.

Anàlisi: s'afegeix RNasa exògena al tampó;L'operació de rentat incorrecta a Buffer PW donarà lloc a RNasa residual i afectarà les operacions experimentals d'ARN aigües avall, com ara la transcripció in vitro.

Suggeriment: els kits d'extracció d'àcids nucleics de la sèrie Foregene poden eliminar l'ARN sense RNasa addicional, i tots els reactius del kit d'aïllament d'ADN vegetal no necessiten RNasa;assegureu-vos de rentar la columna de purificació amb Buffer PW segons les instruccions, i aquest pas no es pot ometre.

4. Residus d'etanol.

Anàlisi: Després de rentar la columna de purificació amb Buffer WB, no es va realitzar cap centrifugació de tub buit.

Recomanació: Seguiu les instruccions per a una centrifugació adequada del tub buit.

Manual d'instruccions:

Manual d'instruccions del kit d'aïllament d'ADN vegetal