• facebook
  • linkedin
  • youtube

Els mètodes de PCR i la contaminació d'aerosols d'àcids nucleics als laboratoris de proves d'àcids nucleics són com les dues cares d'una moneda.Només podem escollir tenir-lo o no, però no podem triar si el volem o el gastem.

contaminació 1

1. Cribratge d'eliminadors d'ADN

Per aconseguir l'eliminació espacial de la contaminació d'aerosols d'àcids nucleics, primer cal eliminar els eliminadors d'ADN que poden eliminar els àcids nucleics en estat líquid.Perquè no hi ha molts eliminadors d'ADN que funcionin realment.Per al mètode experimental, consulteu: l'eliminador d'ADN no pot ser un "racó secret" del laboratori!

En aquest experiment, es van barrejar 100 còpies/μL (CT aproximadament 31) de plasmidi ASFV i eliminador d'ADN quantificats per PCR digital en volums iguals i després es van fer reaccionar a temperatura ambient durant 10 min, 20 min i 30 min respectivament.Després de l'extracció d'àcid nucleic, es va dur a terme l'amplificació de qPCR.Es va comparar un control positiu barrejat amb plasmidi i aigua.Com que l'experiment no es va completar al mateix temps, pot haver-hi una certa desviació entre els resultats, però no afecta la conclusió de l'experiment.Fins ara, he avaluat 10 productes comercials per eliminar l'ADN.Només els productes núm. 1, núm. 6 i núm. 8 poden degradar eficaçment l'ADN plasmídic en estat líquid.Altres productes gairebé no tenen efecte.

Taula 1 Efecte d'eliminació d'àcids nucleics de l'eliminador d'ADN disponible comercialment

contaminació 2

2. L'experiment de l'efecte d'eliminació d'ADN dels desinfectants d'ús habitual

1. Detecció de desinfectants d'ús habitual

Hi ha molts tipus de desinfectants que s'utilitzen habitualment als laboratoris: aldehids, fenols, alcohols, sals d'amoni quaternari, peròxids, preparats de clor i àcids i bases.Els efectes de desinfecció d'aquests desinfectants sobre els microorganismes s'han verificat completament mitjançant experiments, però no hi ha dades experimentals suficients sobre l'efecte de degradació dels àcids nucleics.Els laboratoris de proves d'àcids nucleics necessiten un desinfectant que no només tingui un bon efecte de desinfecció sobre els microorganismes, sinó que també pugui degradar l'ADN.Els resultats de la prova mostren que només dues preparacions de clor de 84 desinfectants i àcid tricloroisocianúric i àcid clorhídric 1 M compleixen els requisits.Atès que l'àcid clorhídric 1 M és altament corrosiu, es recomana utilitzar preparats de clor com a eliminació de residus als laboratoris d'assaig d'àcids nucleics.Tanmateix, els preparats de clor són corrosius per als metalls i no es poden utilitzar per a la desinfecció d'instruments i equips.

Taula 2 Efectes de l'eliminació d'ADN dels diferents tipus de desinfectants

contaminació 3

2. La concentració mínima efectiva de preparats de clor

Els desinfectants a base de clor tenen un fort efecte de degradació de l'ADN, però a causa de la seva corrosivitat i irritació dels metalls, es poden utilitzar per netejar el terra, taulells no metàl·lics, puntes de remull, tubs de centrífuga i altres elements de prova.

Segons les "Noves directrius tècniques de desinfecció epidèmica de pneumònia coronària": Contaminants (sang, secrecions i vòmits dels pacients) clor disponible desinfectant que conté clor 5g/L-10g/L;Els sòls, les parets i les superfícies dels objectes utilitzen clor disponible 1 g/L desinfectant amb clor: la roba, la roba de llit i altres tèxtils es remullen primer amb desinfectant amb clor amb 0,5 g/L de clor disponible durant 30 minuts i després es netegen com és habitual.

Taula 3 Efecte d'eliminació d'ADN de diferents concentracions de desinfectant amb clor

contaminació 4

Els resultats de la prova mostren que: quan la concentració efectiva de clor és superior o igual a 1,2 g/L, el desinfectant que conté clor pot degradar completament 100 còpies/μL de plasmidi quan s'utilitza durant 5 minuts.Quan actua durant 10 minuts, el desinfectant 84 amb una concentració efectiva de clor superior o igual a 0,6 g/L pot degradar completament 100 còpies/μL de plasmidis.

3. Experiment d'eliminació d'aire contaminat per aerosol d'àcid nucleic

Com netejar l'aire contaminat pels aerosols d'àcids nucleics?La majoria dels pensaments són crear un entorn contaminat amb aerosols i després netejar-lo, o netejar els àcids nucleics després de la contaminació.Per a mi, un experiment que no es pot repetir i els resultats de l'experiment no es poden analitzar quantitativament no té sentit, així que vaig agafar en préstec alguns mètodes de desinfecció de l'aire desinfectant.Vegeu "GB27948-2020 Requisits generals per a desinfectants d'aire" i "Especificacions tècniques de desinfecció"

1. Materials de prova

1.1 Eliminador d'ADN: en aquest experiment, es van seleccionar dos eliminadors d'ADN disponibles comercialment 6 i 8 de la taula 1.

1.2 Plàsmidi de prova: tenint en compte que el valor CT de la majoria de la contaminació del laboratori serà superior a 30, la concentració de plasmidi del gen ASFV utilitzat aquesta vegada és d'unes 100 còpies/μL i la CT quantitativa fluorescent de PCR és d'uns 31,07.Afegiu el plasmidi al hisop de cotó flocat i assequeu-lo a l'aire.

contaminació 5

1.3 Instrument de prova: l'instrument de desinfecció Bilingkehan KVBOX, que compta amb el suport de Shenzhen Runlian Environmental Technology Co., Ltd., té un excel·lent rendiment de desinfecció de l'aire amb un desinfectant de peròxid d'hidrogen i pot matar eficaçment les espores i altres microorganismes.

contaminació 6

1.4 Espai de prova: una finestra de transferència tancada d'uns 0,1 metres cúbics.

2. Mètode de prova

contaminació 7

La quantitat de desinfectant establerta a la màquina de desinfecció és de 10 ml i la concentració és de 100 ml/m3, que és molt superior a "GB27948-2020 Requisits generals per a desinfectants d'aire": quan s'utilitza la desinfecció amb aerosol, la quantitat de desinfectant ha de ser ≤10 ml/m3.

contaminació 8
contaminació 10
contaminació 9
contaminació 11

Després de la polvorització, es va segellar durant 2 hores i, a continuació, es va eluir el hisop flocat amb el plasmidi amb TE i es va establir com a control el hisop flocat amb el plasmidi sense fumigació.Utilitzeu el mètode PCR quantitatiu de fluorescència per a la detecció.

Taula 4 Resultats de les proves d'eliminació d'àcids nucleics a l'aire

contaminació 12

3. Resultats de la prova

Dos tipus d'eliminadors d'ADN que poden degradar eficaçment els plasmidis en estat líquid no tenen cap efecte en l'experiment d'eliminació d'àcids nucleics de l'aire.Estic desitjant trobar una solució que es pugui utilitzar per eliminar la contaminació d'aerosols d'àcid nucleic a l'aire per resoldre completament el problema de la contaminació d'aerosols d'àcid nucleic als laboratoris de proves d'àcids nucleics, però de moment no s'ha trobat cap producte d'aquest tipus.Crec que en el futur hi haurà eliminadors d'àcid nucleic d'alt rendiment que es poden utilitzar per eliminar l'àcid nucleic de l'aire.

4. Renunciar a les il·lusions i centrar-se en la prevenció

Per molt que les empreses es vangien dels seus productes d'eliminació d'àcids nucleics, suggereixo que la majoria dels amics que es dediquen a les proves d'àcids nucleics renuncien a les il·lusions d'una vegada per totes i reconeguin la realitat: és molt difícil eliminar l'aire contaminat pels aerosols d'àcid nucleic, o prendre una sòlida mesura preventiva i un treball de seguiment diari!

contaminació 13


Hora de publicació: 10-set-2021