Les proves de laboratori comencen amb la recollida de mostres, i la recollida de mostres és la més fàcil de passar per alt.El més important per a la recollida de mostres és seleccionar el tipus de mostra correcte, utilitzar les eines de mostreig adequades i dur a terme un transport i un processament raonables.

I.Tipus de mostra

Els tipus de mostres habituals són els següents:

El mètode de mostreig pot referir-se a les especificacions tècniques per a la vigilància ambiental del nou coronavirus al mercat del comerç agrícola (basar)”:

1. Mostres de hisopos de cotons de gola, mans, roba i altres objectes dels professionals: cal utilitzar la solució de preservació del virus al tub de mostreig del virus i infiltrar-se completament en els hisops de cotó de mostreig.La superfície del sòl) s'aplica repetidament i es renta més de 3 vegades.Al mateix temps, és necessari realitzar un mostreig distribuït multipunt a la superfície de l'objecte mostrejat.

2. Mostres d'hisop de superfície d'aliments: les mostres d'aliments no es poden recollir directament.Els aliments que s'han de recollir s'han de separar amb cura i emmagatzemar-los en una bossa de mostreig neta abans de recollir les mostres de hisop.Cal utilitzar la solució de preservació del virus al tub de mostreig del virus, després d'haver remullat completament el hisop de cotó de mostreig, per untar i esbandir repetidament la superfície de la mostra d'aliments que s'ha de recollir més de 3 vegades.Al mateix temps, és necessari realitzar un mostreig distribuït multipunt a la superfície de la mostra.

3. Mostres d'aigües residuals: segons la distribució del sistema de drenatge al mercat, seleccioneu 2-3 ubicacions de mostreig d'aigües residuals, centrant-vos en la recollida de la xarxa interna de canonades, aigües avall de la direcció del flux d'aigua o la connexió amb la xarxa de canonades municipals.Per recollir una mostra de hisop, submergiu-la a les aigües residuals amb un cotó de mostreig perquè adsorbeixi les aigües residuals i esbandiu-les al tub de mostreig més de 3 vegades.Per recollir mostres d'aigües residuals, utilitzeu ampolles de plàstic de polietilè per recollir mostres d'aigües residuals de 30-500 ml;Per a la recollida d'aigües residuals amb un volum superior a 500 ml, es poden utilitzar galledes de plàstic de polietilè o equips especials d'enriquiment de mostres d'aigua in situ.Al mateix temps, cal realitzar mostres distribuïdes en diversos punts per a la ubicació de mostreig d'aigües residuals.

4. Mostres d'animals: per als animals vius, es poden fer servir hisops de mostreig per recollir hisops de superfície corporal, hisops orofaríngials i anals, i també es poden recollir mostres d'excrements o secrecions i registrar-les en conseqüència al full de registre.Per a mostres d'animals que s'han sotmès a la pell, etc., utilitzeu hisops de cotó per recollir mostres de la superfície corporal i de la cavitat corporal.Cal utilitzar la solució de preservació de virus al tub de mostreig de virus per infiltrar-se completament en el cotó de mostreig i, a continuació, repetir l'aplicació de la superfície de la mostra d'aliments a recollir.Shabu més de 3 vegades.Al mateix temps, és necessari realitzar un mostreig distribuït multipunt a la superfície de la mostra.

5. Altres aparells: contenidors per al transport i la cria d'animals com gàbies o dipòsits de peixos.En primer lloc, observeu o entengueu els tipus específics d'animals emmagatzemats i criats al contenidor i recolliu mostres de hisop a la paret interior del recipient o mostres líquides del contingut.

6. Recolliu mostres d'aerosols en zones on es reuneix la gent, zones comercials locals mal ventilades, oficines i sales de descans.

II.Eines de mostreig
1. Tub de recollida de sang
Si més endavant necessiteu fer proves d'àcid nucleic i mostres d'anticoagulants, es recomana utilitzar un vas sanguini al buit que contingui anticoagulant EDTA per recollir sang;per a mostres de sèrum, es recomana utilitzar un vas sanguini al buit sense anticoagulant.

2. Hisop de mostreig

Es recomana utilitzar hisops de polipropilè en lloc d'alginat de calci o hisops amb pals de fusta, ja que poden contenir substàncies que inactiven certs virus i inhibeixen les proves de PCR.Els hisops amb caps de cotó no es poden utilitzar, perquè les fibres de cotó tenen una forta adsorció de proteïnes i no s'elueixen fàcilment a la solució de conservació posterior.

A les "Especificacions tècniques per a la recollida i detecció mixtes de nous àcids nucleics de coronavirus 10 en 1", s'estipula clarament que "el hisop de mostreig ha de ser de polièster, niló i altres materials que no siguin cotó ni alginat de calci, i el mànec ha de ser de material que no sigui de fusta.El punt de ruptura es troba a uns 3 cm de la part superior del capçal de l'escut, que és fàcil de trencar".

El CDC als Estats Units també va esmentar "Feu servir només hisops de fibra sintètica amb eixos de plàstic o filferro.No utilitzeu hisops d'alginat de calci o hisops amb eixos de fusta,ja que poden contenir substàncies que inactiven alguns virus i inhibeixen les proves de PCR.

Actualment s'utilitza àmpliament un hisop de niló estèril d'un sol ús combinat amb una vareta de plàstic.El hisop de flocat té una millor absorció d'aigua i velocitat d'alliberament.D'acord amb els diferents llocs de mostreig, el capçal d'hisop també té diferents mides i fibres.El gruix.”

3. Solució de preservació del transport de mostres

Solució de preservació de la inactivació del virus: una quantitat adequada de concentració de sal de guanidina i una varietat de components de lisi del virus poden lisar directament el virus per alliberar àcid nucleic, inactivar RNasa i DNasa i garantir la integritat de l'àcid nucleic, que es pot utilitzar per a la detecció posterior de qPCR.No es pot utilitzar per al cultiu i aïllament de virus.

Solució de transport i conservació del virus: conté sals, aminoàcids, vitamines, glucosa i proteïnes necessàries per a la supervivència del virus, que poden mantenir l'activitat del virus.Es pot utilitzar per a l'extracció d'àcids nucleics i la detecció del virus en el futur, i també es pot utilitzar per al cultiu i la separació del virus.

4. Tub de conservació de mostres i bossa de mostres

El tub d'emmagatzematge de mostres ha de ser un tub de plàstic estèril amb un tap de rosca que no adsorbeixi l'àcid nucleic.Cada tub de mostra s'ha de cobrir amb una bossa de mostra per evitar fuites i contaminació de la mostra.

III.Substàncies interferents a la mostra

Substàncies interferents en experiments de PCR

1. interferent endògena

Les substàncies presents a la mostra corporal poden interferir amb la detecció d'altres substàncies.

Sang:hem (>1mg/ml), hemina (>0,1ng/μl), triglicèrids, IgG, etc.;

Orina:urea (20 mM);

Tamboret:polisacàrids vegetals, colat;

teixit:proteasa, col·lagen;

Llet: proteasa, ió calci;

Drogues: antibiòtics, antivirals, hormones, etc.

altres.

2. interferent exògena

Prové de substàncies que poden interferir amb la detecció d'altres substàncies in vitro.Additius de mostra i substàncies amb les quals es pot contactar durant la recollida i processament de mostres:

Subministraments de prova: gel de separació de sèrum, recipient de recollida de mostres i tap de goma, catèter, líquid de neteja de catèter, pols de guants, etc.

Anticoagulant: heparina (>0,1 U/mL), EDTA (>0,5 mM), etc.;

Dissolvents orgànics: isopropanol (>0,1 UI/ml), betaïna, sulfòxid de dimetil, formamida, glicerina, PEG, etc.;

Desinfectants: alcohols (etanol>1%), aldehids, fenols (fenol>0,2%), peròxids, àcids forts (HCL), àlcalis forts (NaOH), etc.;

Detergent:SDS (>0,005%);

Sòl: Humus

Colorant: Indigo

altres.

En condicions reals de mostreig a l'aire lliure, com ara la recollida de mostres ambientals, les mostres poden contenir una varietat de substàncies interferents i la composició de les substàncies interferents a cada lloc és diferent, cosa que requereix que es realitzin experiments d'interferència de PCR segons les condicions locals.

IV.Condicions d'emmagatzematge i transport de la mostra

Les mostres clíniques acabades de recollir s'han d'enviar al laboratori en un termini de 2 a 4 hores després de la recollida entre 2 °C i 8 °C.Emmagatzemar a 4℃ en 24h.Les mostres utilitzades per a l'aïllament del virus i la detecció d'àcids nucleics s'han de provar tan aviat com sigui possible.Les mostres que es poden provar en 24 hores es poden emmagatzemar a 4 °C;Les mostres que no es puguin detectar en 24 hores s'han d'emmagatzemar a -70 °C o menys (si no, emmagatzemar a 70 °C a la nevera a -20 °C).

Resum:La recollida, transport i emmagatzematge estandarditzats de mostres són essencials per a les proves posteriors.Els falsos negatius de moltes proves de laboratori són causats per la recollida, el transport i l'emmagatzematge inadequats de mostres que condueixen a la degradació de l'àcid nucleic viral.No obstant això, molts laboratoris encara ignoren la importància del mostreig.Espero que aquest article pugui despertar l'atenció de tothom sobre el mostreig i fer un mostreig més científic i raonable!

Producte relacionat:

Kit de detecció d'àcids nucleics variant (I) de SARS-CoV-2 (Mètode de sonda fluorescent PCR múltiple): per a la detecció de mutants del Brasil, Sud-àfrica i el Regne Unit