L'anàlisi següent dels possibles problemes enBucalhisop/TLC card DNA extraction is helpful to your experiment. In addition, for other experimental or technical problems in addition to operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us at: 028-83360257 or E-mali:Tech@foregene.com.

La columna de purificació està obstruïda

En aquest kit, en l'operació d'extracció d'ADN genòmic, la columna de purificació s'adsorbeix directament a la barreja de lisi enzimàtica de la mostra sense pas de centrifugació, i la columna de purificació es pot bloquejar a causa de l'enzimació incompleta i l'alta viscositat de la mostra.

Les possibles causes següents són les següents:

1. Digestió enzimàtica incompleta de mostres de teixit.

Recomanació: el temps de processament de la mostra de Foregene Protease es pot allargar adequadament o el sobrenedant es pot prendre després de la centrifugació a 12.000 rpm (~ 13.400 rpm).× g) durant 5 min.

2. Ús excessiu de mostres de teixit o teixits grans.

Recomanació: és millor no superar 1Bucal hisop a la mostra;si la mostra és massa gran, augmenteu la dosi de Buffer ST1, Foregene Protease, tampon ST2 en conseqüència.

3. La viscositat de la mostra és massa alta.

Recomanació: les mostres es poden diluir adequadament amb 10 mM de Tris-HCl abans de l'extracció d'ADN genòmic.

4. S'han xuclat fragments de la targeta de sang.

Recomanació: el temps de centrifugació transitòria del pas 6 de l'extracció genòmica de taques de sang (targeta FTA) es pot ampliar adequadament.

Rendiment baix o sense ADN

Sovint hi ha una varietat de factors que afecten el rendiment de l'ADN genòmic, com ara l'origen de la mostra, les condicions d'emmagatzematge de la mostra, la preparació de la mostra, la manipulació, etc.

L'ADN genòmic no es pot obtenir durant l'extracció

Les possibles causes són les següents:

1. La conservació inadequada de les mostres o l'emmagatzematge durant massa temps condueixen a la degradació de l'ADN genòmic.

Recomanació: Preferiblement, els hisops orals s'han de prendre mostres recents, i no és aconsellable utilitzar hisops conservats per a les operacions d'extracció d'ADN genòmic;Les mostres de taques de sang haurien de garantir que la qualitat sigui qualificada i el temps d'emmagatzematge no hauria de ser massa llarg.

2. Un ús massa baix de teixit pot provocar que no s'extragui l'ADN genòmic corresponent.

Recomanació: Seguiu elbucal Instruccions de mostreig d'hisop a la guia d'operacions i netejar tantes vegades com sigui possible perquè es puguin unir suficients cèl·lules a l'escut oral per a l'extracció d'ADN genòmic;per a l'extracció de mostres de taques de sang, l'àrea de tall de taques de sang es pot augmentar adequadament.

3. La proteasa del gen anterior es conserva de manera inadequada, la qual cosa provoca una disminució de la seva activitat o inactivació.

Recomanació: Confirmeu les condicions d'emmagatzematge dela Foregene Protease o substituir-la per una nova Foregene Protease per a la reacció enzimàtica.

4. La conservació inadequada del kit o el temps d'emmagatzematge és massa llarg, cosa que provoca la fallada d'alguns components del kit.

Recomanació: comprar-ne un nouBucal hisop d'ADNaïllament kit per a tràmits relacionats.

5. El tampó WB no afegeix etanol absolut.

Recomanació: Confirmeu que el tampó WB afegeix el volum correcte d'etanol absolut.

6. L'eluent no s'afegeix correctament a la pel·lícula de silicona.

Recomanació: afegir 65°Cl'eluent preescalfat cau al centre de la membrana de silicona i es deixa a temperatura ambient durant 5 minuts per augmentar l'eficiència d'elució.

LADN genòmic de baix rendiment aïllat

Les possibles causes següents són les següents:

1. La conservació inadequada de les mostres o l'emmagatzematge durant massa temps condueixen a la degradació de l'ADN genòmic.

Recomanació: els hisops orals es mostren preferiblement recentment, i els hisops conservats no s'han d'utilitzar per a l'extracció d'ADN genòmic.

2. Si la quantitat de mostra de teixit és massa petita, el contingut d'ADN genòmic extret serà menor.

Recomanació: seguiu les instruccions de mostreig d'un hisop oral a la guia d'operació, netejant tantes vegades com sigui possible de manera que es puguin unir suficients cèl·lules a l'hibut oral per a l'extracció d'ADN genòmic.

3. La proteasa del gen anterior es conserva de manera inadequada, la qual cosa provoca una disminució de la seva activitat o inactivació.

Recomanació: Confirmeu les condicions d'emmagatzematge dethe Foregene proteasa o substituir-la per una nova Proteasa del gen anterior per a la reacció enzimàtica.

4. Problemes d'eluents.

Recomanació: Utilitzeu el tampó EB per a l'elució;si s'utilitza ddH₂O o altres eluents, confirmeu que el pH de l'eluat està entre 7,0-8,5.

5. L'eluït no s'afegeix correctament gota a gota.

Recomanació: Afegiu gotes d'eluint al centre de la membrana de silicona i deixeu-ho a temperatura ambient durant 5 minuts per augmentar l'eficiència d'elució.

6. El líquid d'elució s'acumula massa poc.

Recomanació: Utilitzeu l'eluent per a l'elució de l'ADN genòmic tal com es requereix a les instruccions, almenysno menys de 15μl.

Lquina puresa of DNA genòmicaïllat

La baixa puresa de l'ADN genòmic pot provocar un fracàs o resultats insatisfactoris dels experiments aigües avall, com ara: els enzims no es poden tallar, la PCR no pot obtenir el fragment genètic d'interès, etc.

Les possibles causes són les següents:

1. Contaminació per heteroproteïnes, contaminació per ARN.

Anàlisi: la columna de purificació no es va rentar amb Buffer PW;la columna de purificació de rentat Buffer PW no es va rentar amb la velocitat centrífuga correcta.

Recomanació: Assegureu-vos que no hi hagi precipitació en el sobrenedant abans d'afegir etanol;assegureu-vos de rentar la columna de purificació segons les instruccions i aquest pas no es pot ometre.

2. Contaminació d'ions impures.

Anàlisi: la columna de purificació de rentat de buffer WB es va ometre o es va rentar només una vegada, donant lloc a una contaminació iònica residual.

Recomanació: assegureu-vos de rentar el tampó WB 2 vegades segons les instruccions per eliminar els ions residuals tant com sigui possible.

3. Contaminació per enzims d'ARN.

Anàlisi: es van afegir RNases estrangeres al tampó;L'operació de rentat del tampó PW era incorrecta, donant lloc a residus de RNasa, afectant les operacions experimentals d'ARN aigües avall, com ara la transcripció in vitro.

Recomanació: Àcid nucleic de la sèrie ForegeneaïllaEls kits de tractament poden eliminar l'ARN sense afegir RNasa addicional,així Kit d'aïllament d'ADN d'hisop bucal/targeta FTAnecessari't afegir RNasa;assegureu-vos de seguir les instruccions per a la columna de purificació de rentat Buffer PW i aquest pas no es pot ometre.

4. Residus d'etanol.

Anàlisi: el tampó WB no va realitzar la centrifugació del tub buit després de rentar la columna de purificació.

Recomanació: Realitzeu l'operació correcta de centrifugació del tub buit segons les instruccions.

5. Altres contaminacions per impureses.

Anàlisi: les mostres guardades o les mostres especials no es tracten prèviament.

Recomanació: pretracteu la mostra a fons segons les instruccions.