Preguntes freqüents per aKit d'aïllament d'ARN total animal

La següent anàlisi dels problemes amb els quals us podeu trobarextracció d'ARN de teixit animal/cel·lular will help you with your experiments. In addition, for other experimental or technical problems in addition to operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us at: 028-83360257 or E-mali : Tech@foregene.com.

L'ARN no s'extreu o els rendiments d'ARN són baixos

Sovint hi ha una varietat de factors que afecten l'eficiència de la recuperació, com ara: contingut d'ARN de la mostra de teixit, mètode d'operació, volum d'elució, etc.

1. Durant el funcionament es va realitzar una centrifugació amb bany de gel o criogènica (4 °C).

Recomanació: Operar a temperatura ambient (15-25 °C) durant tot el procés, no banyar-se amb gel i centrifugar a baixa temperatura.

2. Conservació inadequada de la mostra o temps d'emmagatzematge excessiu de la mostra.

Recomanació: emmagatzemar les mostres a -80 °C o congelar en nitrogen líquid i evitar l'ús repetit de congelació-descongelació;intenteu utilitzar teixit fresc o cèl·lules cultivades per a l'extracció d'ARN.

3. Lisi insuficient de la mostra.

Recomanació: en homogeneïtzar el teixit, assegureu-vos que el teixit estigui prou homogeneïtzat i que les cèl·lules del teixit estiguin prou dividides per explicar l'alliberament d'ARN.

4. L'eluent no s'afegeix correctament.

Recomanació: confirmeu que el ddH lliure de RNasa₂S'afegeix O gota a gota al centre de la membrana de la columna de purificació.

5. No es va afegir el volum correcte d'etanol absolut al tampó RL2 o al tampó RW2.

Recomanació: Seguiu les instruccions, afegiu el volum correcte d'etanol absolut a Buffer RL2 i Buffer RW2 i barregeu bé abans d'utilitzar el kit.

6. La dosi de la mostra de teixit no és adequada.

Recomanació: utilitzeu 10-20 mg de teixit o (1-5) × 10⁶cèl·lules per 500 μl de tampó RL1, ja que l'ús excessiu de teixits pot provocar una reducció de l'extracció d'ARN.

7. Volum d'elució incorrecte o elució incompleta.

Recomanació: el volum d'elució de la columna de purificació és de 50-200 μl;si l'efecte d'elució no és satisfactori, es recomana allargar el temps de col·locació a temperatura ambient després d'afegir ddH preescalfat sense RNasa.₂O, p. ex. durant 5-10 min.

8.La columna de purificació té residus d'etanol després del rentat del buffer RW2.

Recomanació: si hi ha residus d'etanol després del rentat del buffer RW2, centrifugació del tub buit durant 1 min, el temps per a l'operació de centrifugació del tub buit es pot augmentar a 2 min, o la columna de purificació es pot col·locar a temperatura ambient durant 5 min per eliminar adequadament l'etanol residual.

L'ARN purificat es degrada

La qualitat de l'ARN purificat està relacionada amb factors com la conservació de la mostra, la contaminació de la RNasa i la manipulació, etc.

1. Les mostres de teixit no es conserven a temps.

Recomanació: si les mostres de teixit o cèl·lules no s'utilitzen de manera oportuna després de la recollida, criopreservar immediatament a -80 °C o nitrogen líquid.Per extreure l'ARN, utilitzeu una mostra de teixit o cèl·lula acabada de prendre sempre que sigui possible.

2. Congelació-descongelació repetida de mostres de teixit.

Recomanació: en emmagatzemar mostres de teixit, el millor és tallar-les en trossos petits per a la seva conservació i treure'n una de les peces quan les utilitzeu per evitar la congelació-descongelació repetida de la mostra i la degradació de l'ARN.

3. La RNasa s'introdueix o no utilitzant guants d'un sol ús, mascaretes, etc. durant l'operació.

Recomanació: els experiments d'extracció d'ARN es realitzen millor en sales de manipulació d'ARN separades i la taula s'esborra abans de l'experiment.

Utilitzeu guants i màscares d'un sol ús durant l'experiment per minimitzar la degradació de l'ARN causada per la introducció de la RNasa.

4. Els reactius estan contaminats amb RNasa durant l'ús.

Recomanació: substituïu-lo per un nou kit d'aïllament d'ARN total animal per a experiments relacionats.

5. Els tubs de centrífuga, puntes, etc. utilitzats en la manipulació de l'ARN estan contaminats amb RNasa.

Recomanació: Confirmeu que els tubs de centrífuga, puntes, pipetes, etc. utilitzats en l'extracció d'ARN no contenen RNases.

L'ARN obtingut purificat afecta els experiments aigües avall

L'ARN purificat per la columna de purificació, si els ions de sal, el contingut de proteïnes és massa gran afectarà l'experiment aigües avall, com ara: transcripció inversa, Northern Blot et al.

1. L'ARN eluït té residus d'ions de sal.

Recomanació: Confirmeu que s'ha afegit el volum correcte d'etanol al tampó RW2 i feu 2 rentats de columna de purificació a la velocitat centrífuga indicada per al funcionament;si hi ha residus d'ions de sal, deixeu la columna de purificació al tampó RW2 durant 5 min a temperatura ambient i feu una centrifugació per maximitzar l'eliminació de la contaminació de la sal.

2. Residus d'etanol en l'ARN eluït.

Recomanació: Confirmeu que després del rentat del tampó RW2, realitzeu l'operació de centrifugació del tub buit a la velocitat de centrifugació indicada per al funcionament, augmenteu el temps de l'operació de centrifugació del tub buit a 2 minuts si encara hi ha residus d'etanol o deixeu-lo a temperatura ambient durant 5 minuts després de la centrifugació del tub buit per maximitzar l'eliminació de l'etanol.

Aïllament de tipus de mostres d'àcid ulceic

Els kits d'aïllament d'ARN de Foregene poden obtenir l'aïllament/extracció total d'ARN de les següents fonts de mostra: teixit animal, vegetal, cèl·lules, virus, sang, etc.

Com guardo el kit

Emmagatzematge a temperatura ambient durant 24 mesos.