RNasa és una paraula sensible que molts estudiants que sovint realitzen experiments d'extracció d'ARN no volen escoltar.Completament armat, l'ARN que finalment es va extreure amb els reactius altament tòxics fenol i cloroform es va degradar.No estic reconciliat!!!Avui, fem una ullada a l'origen del famós Rnase.

La ribonucleasa (RNasa), o RNasa, és una nucleasa que pot hidrolitzar l'ARN en molècules petites.La RNasa, com a proteïna de molècula petita, és inusualment estable .L'esterilització convencional amb vapor d'alta temperatura i alta pressió i els inhibidors de proteïnes no poden desactivar-lo completament.L'estabilitat de la RNasa prové principalment dels enllaços disulfur de l'estructura.Per exemple, la RNasa d'ús habitual del pàncrees boví només té 124 aminoàcids, però conté 4 enllaços disulfur.L'enllaç de sofre i l'enllaç disulfur donen a la RNasa una excel·lent estabilitat tèrmica.A més, la rnasa té un pes molecular relativament petit i pot restaurar ràpidament la seva conformació original en molts casos.

A més de ser extremadament estable,Les RNases són omnipresents al laboratori .La RNasa és un mecanisme de defensa biològica.Per a una cèl·lula, l'ARN exògen sovint és fatal.En comparació amb l'ADN exògen, l'ARN exògen sovint és més perillós.L'ARN es transcriu i es tradueix feliçment, de manera que gairebé tots els organismes han desenvolupat RNases per defensar-se de la invasió d'ARN exògen.Per tant, les cèl·lules bacterianes cultivades al laboratori i tu que extreu l'ARN desprenen l'aroma de la RNasa.Els fluids corporals humans (saliva, llàgrimes, etc.) contenen una gran quantitat de RNasa, així que no ploris quan l'ARN es degrada.Com més ploreu, pitjor serà la degradació de l'ARN!!La germana Daiyu no és adequada per a l'extracció d'ARN!

A més, la teva pell delicada també conté molta RNasa, i els marcadors, pipetes, portes de la nevera i manetes de les portes que han estat tocades per la pell també contenen RNasa.

Amb tanta divagació, fem una ullada a com tractar les RNases.

El primer que tothom pensa a l'hora d'eliminar l'ARN ésDEPC(pirocarbonat de dietil).DEPC desnaturalitza principalment la proteïna combinant-se amb l'anell imidazol del grup actiu de la RNasa histidina, inhibint així l'activitat de l'enzim.El DEPC del 0,1% pot tenir un millor efecte d'eliminació de la Rnase, però hem de prestar atenció al fet que el DEPC és un carcinogen conegut, per la qual cosa s'ha de prestar una atenció especial quan l'utilitzeu.

Per a la RNasa, hem de partir de dos aspectes,el primer és inhibir l'activitat de la RNasa endògena

Els reactius d'extracció d'ARN convencionals, com ara l'isotiocianat de guanidina i el DTT continguts a Trizol, poden obrir l'enllaç disulfur de la RNasa, però encara hi ha algunes RNases, especialment en mostres de teixit, així que presteu atenció a la baixa temperatura.

1.Submergiu immediatament la mostra de teixit en nitrogen líquid després de treure-la, o en una solució comercial de preservació d'ARN.

2.Després d'extreure l'ARN de la mostra cel·lular, afegiu-lo a la solució de lisi i liseu-lo a la caixa de gel

3. El millor és utilitzar nitrogen líquid per a la mòlta quan les mostres de teixit s'homogeneïtzen.Quan utilitzeu un homogeneïtzador elèctric sense nitrogen líquid, presteu atenció al refredament complet de l'adaptador d'homogeneïtat.

La segona és la DNasa exògena

1.Anar completament armat, portar una bata de laboratori, portar una màscara i assegurar-se de portar un parell de guants nous (no siguis tan estalviador! Cal tenir en compte que Trizol és súper corrosiu, i també és molt fort a través dels guants, així que no et degoteixis a les mans).

2.Totes les puntes de pipeta, tubs EP, tubs PCR i altres equips utilitzats han de ser tractats amb de-RNasa.Es pot remullar en DEPC al 0,1% i després pressuritzar-se a alta pressió.Preste atenció al funcionament en una campana de fums.Els tirans locals poden comprar directament consumibles per eliminar enzims.

PD: Deixa'm dir-te un mètode mandros.Tot i que l'alta temperatura i l'alta pressió no poden eliminar completament la RNasa, n'eliminarà una gran part.2 vegades d'alta temperatura i alta pressió té un bon efecte, i l'extracció d'ARN té poc efecte.

3.L'alcohol pot desnaturalitzar les proteïnes,de manera que la taula d'extracció d'ARN es pot netejar amb alcohol al 75%. , i els guants també es poden ruixar amb alcohol.

4.La solució final de dissolució d'ARN i el tub de centrífuga també s'han de tractar amb des-RNasa.L'aigua DEPC és una solució de dissolució d'ARN que s'utilitza habitualment.Parlem del mètode correcte de preparació de l'aigua DEPC (recordeu tornar a empaquetar el DEPC comercial quan el compreu)

Afegiu DEPC a aigua ultrapura a 1:1000, agiteu bé, deixeu reposar durant la nit a 37 °C i esterilitzar a 121 °C a alta temperatura i alta pressió durant 15 minuts.L'aigua DEPC es pot emmagatzemar a -20 ° C en alíquotes d'1 ml.

Finalment, per resumir: la baixa temperatura és la clau, els consumibles es manipulen bé, completament armats i es parla menys!

Bé, això és tot per a l'estratègia d'avui.Us desitjo tota la concentració i puresa d'ARN que heu mencionat.Tots dos A260/A280 són 2.0!!!

Per descomptat, si utilitzeu aKit d'extracció d'ARN de funcionament a temperatura ambient, és possible que no us trobeu amb els problemes anteriors.

El funcionament a temperatura ambient, sense afegir DNasa, extreu l'ARN total de les cèl·lules en 11 minuts i l'ARN total de teixits animals o plantes en 30 minuts.

Per obtenir mostres de prova, poseu-vos en contacte amb:overseas@foregene.com

Productes relacionats:

https://www.foreivd.com/cell-total-rna-isolation-kit-product/

https://www.foreivd.com/animal-total-rna-isolation-kit-product/

https://www.foreivd.com/plant-total-rna/